蘋果皮中總黃酮提取及抑菌作用的分析畢業論文(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 。提取次數一般是2～4次，可用冷浸法或加熱抽提法提取。（2）堿性稀醇或堿性水提取：在黃酮類化合物中大多數含有多個酚羥基具有酸性，因此堿性溶液有助于黃酮類化合物的提取，但堿的濃度不宜過高，以免在強堿條件下加熱破壞黃酮類化合物的母核。（3）系統溶劑提取：用極性從小到大的溶劑依次提取，可以提取出大多數游離的黃酮化合物，但此法目前僅用于實驗室，很難工業化生產。（4）超濾法：選用超濾法可以提高提取物的純度，并且在提取生產過程中，可以減少廢水排放，避免臭水、污水的產生，能降低生產成本。（5）微波提取法：微波技術是將細胞壁和細胞膜破碎或溶解，以提高藥物有效成分或有效部位提取率的物理輻照方法。微波萃取具有設備簡單、節省時間、節省試劑、污染小、穿透力強、選擇性好、加熱效率高等特點。（6）超聲波提取法：超聲波是頻率高于20kHz。并且不引起聽覺的彈性波。現普遍認為其空化效應、熱效應和機械作用是超聲技術在中藥提取中的三大理論依據。超聲波在媒質中傳播?？墒姑劫|質點在其傳播空氣內進入振動狀態，強化溶質擴散、傳遞，即超聲波機制。超聲波在媒質質點傳播過程中其能量不斷被媒質質點吸收變成熱能，導致媒質質點溫度升高。同時當大量的超聲波作用于提取介質，振動處于稀釋狀態時，介質被撕裂成許多小空穴，這些小空穴瞬時閉合，閉合時產生高達幾千大氣壓的瞬時壓力，即空化現象。超聲波破碎過程是一個物理過程，浸提過程中無化學反應，被浸提的生物活性物質在短時內保持不變，生物活性不減，同時提高破碎速度，縮短了破碎時間，可極大地提高提取效率。隨著現代科學的發展，超聲技術已得到泛應用，而把超聲技術用于中藥有效成分的提取，近年來才被重視。天然植物藥用成分大多為細胞內產物，提取時需要將細胞破碎，而現有的機械或化學方法有時難于取得理想的破碎效果。研究表明，利用超聲波產生的強烈振動，高加速度、強烈空化效應、攪拌作用等，都可加速藥物有效成分進入溶劑，從而提高提出率，縮短提取時問，節約溶劑，并且免去了高溫對提取成分的影響。本實驗及采取超聲波提取法。 國內外研究概況黃酮類化合物藥理功效已在國內外得到普遍認可，在醫藥中及功能性食品應大有發展前景，但目前蘋果皮黃酮類藥物還很少，因而日益引起重視并不斷探討和提取分離新的黃酮類化合物。我國對含有大量黃酮類化合物的植物開發研究較多。如沙棘的果實是我國古代藏醫、蒙醫用來治病的常用藥物，山植的果實和葉子作為中藥材在古典醫書中己有記載，兩者均有桂痰、利肺、養胃、健脾、活血的藥理功能。蘇聯從50 年代到80代，有9項沙棘研究成果獲國家專利，其中藥用油己廣泛投入醫用。1995年日本從沙棘油中精制提取出了最新的抗癌針劑藥物。近年來，我國對沙棘、山植的藥用研究開始活躍起來，相繼報道了這兩種植物中的提取物在抗癌治癌方面以及對心血管疾病、燒傷等方面的治療功效。當今，沙棘和山植已被人們視為寶貴的藥用植物，經研究發現這兩種植物中除含有人體必須的氨基酸、微量元素及多種維生素外，還有黃酮類化合物的存在。許多藥理功能與這類物質有關。近年來隨著分離提取技術的發展，發現了大量新黃酮類化合物，也掀起了對它們的研究熱潮，開發了數種含有黃酮類物質的產品。在醫藥方面，根據其在心血管系統、內分泌系統、抗腫瘤方面的藥理作用，很多以黃酮類成分為主的制劑已作為成藥上市。在食品中它們應用于功能性食品添加劑和功能食品中。在獸藥、農藥等領域，現已開發出了一些具有特效功能的含有黃酮類化合物藥品和驅蟲、殺蟲劑等。黃酮類化合物以其廣譜的抑菌作用和生理活性,引起了世界各國研究、開發、利用的熱潮。我國植物資源豐富，且所有植物的花、葉、莖中都含有一定的類黃酮。國內外的學者們對黃酮類化合物的積極研究為其在醫藥、食品等中的應用提供了理論依據，以便生產出具有治療特異性高、高效、低毒的藥品和天然保健品，加速植物資源的有效開發利用。 本實驗的立題背景近年，國內外對植物中黃酮類化合物的研究越來越深入，隨著分子生物學、化學分析學等相關科學的相互滲透，對黃酮類化合物的提取及藥理作用都有了很大進展,逐漸發現黃酮類化合物不僅是天然活性成分中極具應用潛力的資源之一，而且是低毒甚至無毒的藥用成分,成為國內外醫學界的熱門研究。我國有著豐富的蘋果資源，本課題在已有的研究試驗方法和試驗設備基礎上，主要是探討從蘋果皮中提取黃酮類化合物最佳方法，并對蘋果皮中黃酮類化合物進行初步的抑菌性研究，一方面為全面開發蘋果皮黃酮及蘋果皮黃酮生產技術的研究提供科學依據和方法，另一方面對其以后在生產中的應用具有重要意義，進一步促進我國蘋果資源的綜合利用，創造更高的經濟效益和社會效益。本研究采用超聲波輔助法提取蘋果皮中的總黃酮，且采用濾紙片法研究蘋果皮提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抑菌效果。實驗先以蘆丁為標準品用分光光度法，采用乙醇提取超聲波輔助法，通過實驗初步探尋乙醇濃度、超聲波溫度及時間、料液比等單因素提取蘋果皮中總黃酮的最佳點，進一步利用正交試驗驗證、確定各單因素的最適實驗條件，優選提取參數后，用此參數實驗得到樣品提取液，再采用濾紙片法測定樣品提取液對對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑，及其最低抑菌濃度的測定，從而證明蘋果皮對以上菌體有不同程度的抑菌作用，證明蘋果皮提取液具有抗菌性。第二章 蘋果皮中總黃酮的提取工藝條件及抑菌試驗方法 實驗材料與儀器 實驗原料蘆丁(中國藥品生物制品檢定所)； 蘋果皮：分別準備富士蘋果皮、花牛蘋果皮、國光蘋果皮若干，置于40℃烘箱中干燥，將干燥后的皮粉碎，過60目篩備用；供試菌種：供試細菌包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌；4培養基：牛肉膏蛋白胨培養基。 實驗試劑無水乙醇；(分析純,純度≥99. 7% )；亞硝酸鈉（分析純）；氫氧化鈉（分析純）；硝酸鋁（分析純）；蒸餾水；氯化鈉（分析純）；瓊脂；牛肉膏；蛋白胨；氯化氫；碳酸氫鈉。 實驗儀器與設備電熱恒溫鼓風干燥箱 上海躍進醫療器械廠高速藥物粉碎機 州市精誠機械有限公司 冰箱 海爾722N可見分光光度計 上海精密科學儀器有限公司 電子分析天平 北京賽多利斯儀器系統有限公司臺式高速離心機(TGL16G) 上海安亭科學儀器廠超聲波藥品處理機 濟寧金百特工程機械有限公司旋轉蒸發器(RE一5298) 上海亞榮生化儀器廠不銹鋼手提式滅菌器（DSX280A） 上海申安醫療器械廠隔水式恒溫培養箱 北京市永光明醫療器械廠電子萬用爐 天津市泰斯特儀器有限公司 實驗內容與方法 蘆丁標準曲線的繪制，用甲醇溶解并定容至25ml，搖勻。，以蒸餾水為空白對照,；加入5%的亞硝酸鈉1ml，搖勻，放置6min；加10%，搖勻，放置6min；再加4%，加水至刻度，搖勻，放置10min。用蒸餾水樣作空白對照，在190~ 600nm波長范圍內進行掃描，結果在510nm處有最大吸收峰。取0，，，，按上述方法操作后，在510nm波長處測其吸光度，繪制濃度 吸光度曲線。對數據求算回歸方程，得Y=，R178。=。 單因素實驗