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最新探究性設計試驗(編輯修改稿)

2026-07-27 03:54 本頁面

　

【文章內容簡介】 1）動物及灌流液同Langendorff模型，與Langendorff模型不同的是，工作心臟模型是一種雙灌流裝置，它不僅有主動脈灌流系統而且還有左房灌流系統，主動脈流入道和流出道通過三通連接互相轉換，流出道的壓力（后負荷）可以通過管道內液平面高度來調節。前負荷可以調節左房灌注系統儲槽的液面高度。（2）操作的前半部分同Langendorff模型，在實行完主動脈逆行灌注后行肺靜脈插管入左房連接左房灌流系統，結扎固定。（3）由心尖部向左室插入一充滿營養液的PE管，連接換能器至生物信號轉換儀，可以測量左室內壓變化及心率。（4）持續主動脈逆行灌流10min待心臟搏動平穩后，關閉主動脈流入道，打開主動脈流出道，并開始心房灌流，預灌流15～20min，待心跳平穩后開始實驗。（五）觀察項目自行設計多因素影響離體心臟的觀察項目或心功能指標。（六）討論分析（1）對實驗目的、設計原理進行闡釋，實驗結果進行總結與歸納。（2）對實驗中出現的各種觀察指標變化進行分析，探討其變化的發生機制。（3）如實驗結果不理想，請分析其失敗的原因和提出改進的措施。（七）時間節點（1）完整、詳細的實驗設計方案必須在實驗課的前一周完成，設計方案不合格者將取消實驗資格。（2）實驗操作時間必須控制在1天以內。（3）一周后以小組為單位用多媒體匯報實驗結果和討論分析。（八）注意事項（1）主動脈懸掛結扎的位置不能太深，以免阻塞冠狀動脈入口或損傷主動脈瓣造成關閉不全。（2）在整個實驗過程中要注意保持心臟周圍溫度37℃左右，℃（3）灌流液事先要用氧氣充分飽和，一般為20～30min。（4）灌流液經心臟冠脈循環后由冠狀靜脈竇流入右心房及右心室，最后從肺動脈流出，因此，在操作中如果結扎了肺動脈，會出現右室迅速彭出的情況或將。（陳紅）三、大鼠離體主動脈血管功能的擴展性實驗（一）實驗目的通過離體主動脈血管張力變化記錄觀察血管的收縮功能與舒張功能。如果采用動物疾病模型，如遺傳性高血壓動物可以觀察到血管內皮或平滑肌功能損傷。（二）實驗條件1．實驗動物大白鼠。2．藥品與器材戊巴比妥鈉，KrebsHenseleit緩沖液，克氏液，離體血管灌流槽，恒溫灌流裝置，微電極放大器，培養皿，哺乳動物手術器械， PowerLab 8S主機，微操縱器，冷光源，含95% O2+5% CO2混和氣體等。（三）實驗基本過程1．血管環制備（1）大鼠麻醉后開胸剪除心臟，將肺組織向前翻開剪除，用有齒鑷夾住主動脈上端并輕輕提起，在主動脈后方延胸壁向下剪開結締組織，分離主動脈，剪除有齒鑷夾持而損傷的部位。（2）將主動脈放入含有KrebsHenseleit緩沖液的平皿，KrebsHenseleit緩沖液成份（mmol/L）：NaCl ，KCl ，CaCl2 ，MgSO4 ，KH2PO4 ，NaHCO3 ，glucose ，Na2EDTA 。（3）仔細分離剪除血管外脂肪組織與疏松血管外膜，然后將血管剪成2～3 mm長的血管環。（4）用一不銹鋼掛鉤將血管環挑起并懸掛于張力換能器上，調整掛鉤血管環與另一固定掛鉤的距離，然后將血管環穿入另一掛鉤，調整血管環在兩掛鉤間的相對位置，掛鉤位置固定后緩慢施加前負荷（靜息張力）至2 g（扣除掛鉤重量）。（5）將掛鉤連同血管環浸入含有預平衡緩沖液（37℃）的血管槽，緩沖液持續通以95％氧氣＋5％二氧化碳，使每一血管環在血管槽內的位置相對一致，平衡40～60min，期間每10～15min更換液體一次，待血管張力穩定后可開始實驗。2．血管收縮舒張功能檢測（1）以60 mmol/L 氯化鉀使血管環平滑肌去極化,反復重復此過程2次使血管環收縮達坪值；沖洗。（2）重新平衡血管環，再用1mmol/L苯腎上腺素預收縮血管, 待張力上升并穩定（通常1mmol/L苯腎上腺素加入后10～15min達平臺）后, 加入1mmol/L乙酰膽堿舒張血管,以檢測血管內皮的完整性（或稱內皮依賴性血管舒張反應）。（3）最大舒張反應大于80 %的血管環可被認為內皮完整,并用于內皮依賴性血管實驗。（4）去血管內膜的主動脈血管環制備：以直徑與血管環相似的細綿簽穿入血管腔內，在濕紗布上輕輕來回摩擦血管內腔3～5次，或以PE10或PE50管穿入血管腔內，將血管在濕紗布上輕輕滾動摩擦以去除血管內膜。用苯腎上腺素預收縮血管后在用乙酰膽堿檢驗血管舒張反應，如血管對乙酰膽堿無舒張反應或呈收縮反應，說明血管去除完全。（四）觀察項目自行設計與確定影響主動脈血管的實驗條件、觀察項目，記錄實驗結果。（五）討論分析1．對實驗目的、設計原理進行闡釋，實驗結果進行總結與歸納。2．對實驗中不同藥物使用后的各種觀察指標變化進行分析，探討其變化的發生機制。3．如實驗結果不理想，請分析其失敗的原因和提出改進的措施。（六）時間節點1．完整、詳細的實驗設計方案必須在實驗課的前一周完成。2．實驗操作時間控制在1天以內。3．一周后以小組為單位用多媒體匯報實驗結果和討論分析。（七）附錄及注意事項1．血管收縮與舒張工具藥及其使用濃度：（1）緩沖溶液的配制1）KrebsHenseleit緩沖溶液的配制：KrebsHenseleit溶液為離體血管及離體心臟實驗常用的一種緩沖溶液，具體配制試劑及用量（見表71）。表71　KrebsHenseleit’s Solution for Isolated Vessel PerfusionSalt Molecular weightmmol/lg/lg/2lg/5l1NaCl

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