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創(chuàng)新計劃課題投標(biāo)書(編輯修改稿)

2025-08-30 01:15 本頁面

　

【文章內(nèi)容簡介】 ②含量測定：人參皂苷RgRe 的含量測定擬采用薄層掃描法（TLCS法）或高效液相色譜法（HPLC法）進(jìn)行測定：取本品內(nèi)容物約10g，精密稱定，加乙醚適量回流提取1小時，濾過，棄去乙醚液，藥渣揮干溶劑，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加水30ml溶解，置分液漏斗中，加水飽和正丁醇溶液提取4次，每次30ml，合并正丁醇溶液，加氨試液洗滌3次，每次80ml,棄去氨試液，正丁醇溶液蒸干，殘渣加甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1和Re對照品。供試品溶液點2μl，對照品溶液點2μl和4μl。層析條件：硅膠GCMCNa薄層板，正丁醇－乙酸乙酯－水（4︰1︰5）上層溶液為展開劑，10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，105℃加熱至斑點顯色清晰。在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行掃描測定，λS=530nm，λR=650nm。或采用HPLC法進(jìn)行測定：以十八烷基硅烷化鍵合硅膠為填充劑，乙腈－％磷酸溶液（20︰80）為流動相，檢測波長為203nm。對照品溶液和供試品溶液各進(jìn)樣10μl。③初步穩(wěn)定性試驗：a. 常溫下考察法：對常溫下放置的樣品進(jìn)行考察，以開始考察的結(jié)果為0月結(jié)果，以后每月考察一次，連續(xù)考察三個月。考察項目和指標(biāo)按膠囊劑要求進(jìn)行，即對本品的性狀、鑒別、水分、溶散時限、衛(wèi)生學(xué)檢查和含量測定等項目進(jìn)行考核。b. 加速試驗法：在進(jìn)行常溫下考察的同時，還進(jìn)行加速試驗考察，將本品在臨床試驗用包裝條件下，于37～40℃和相對濕度75％條件下保存，每月考核一次，連續(xù)三個月進(jìn)行考核。藥理藥效學(xué)試驗：①抗心肌缺血試驗a. 阻斷犬冠狀動脈致心肌缺血（犬冠脈結(jié)扎法）取犬巴比妥鈉麻醉，分離氣管，開胸，暴露心臟，分離冠狀動脈左前降支中段，以備結(jié)扎，縫置心外膜電極，用多導(dǎo)生理記錄儀記錄心外膜電圖（20個），待穩(wěn)定后，結(jié)扎冠狀動脈，30min后記心外膜電圖作為用藥前對照，然后分安心膠囊組（大、小兩個劑量）、陽性對照組（消心痛）、空白對照組三組給藥。給藥后60min、120min、180min測定心外膜電圖，計算ST值變化，進(jìn)行組間比較用F檢驗或作自身對照。b. 家兔急性心梗范圍的影響（NBT染色法）~3kg的家兔40只，隨機(jī)分為四組，1組為安心膠囊大劑量組（30g/kg）、2組為安心膠囊小劑量組（15g/kg）、3組為消心痛組、4組為空白對照組。家兔背部固定于手術(shù)臺上，麻醉下開胸。在左冠狀動脈前降支處穿線以備結(jié)扎。結(jié)扎前給藥一次，給藥后30min結(jié)扎冠狀動脈，立即縫合切口，3h后再給藥一次。結(jié)扎6h后處死動物，取出心臟，橫切4~5片，以NS沖冼，涼干稱重。將心肌片放入NBT染色液中，15min取出，正常心肌為蘭色，梗塞心肌不染色，切下梗塞心肌稱重，計算梗塞心肌所占心臟的百分率，與對照組比較作F檢驗。c. 藥物致大鼠（或豚鼠）急性心肌缺血EKG的影響取大鼠40只，隨機(jī)分為四組。給藥同上。烏拉坦溶液麻醉，分離頸靜脈，連接有注射器的塑料套管，大鼠四肢安插針狀電極，描記正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖。，觀察EKG，恢復(fù)后注入供試藥，記錄60min內(nèi)不同時間EKG的變化。以ST段和T波升高為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，評定藥物對心肌缺血的作用。②抗心肌缺氧試驗（小鼠氣管結(jié)扎法）取小白鼠40只，隨機(jī)分為四組。用藥同上，連續(xù)給藥兩周。末次給藥后1h，麻醉，分離氣管，四肢連接心電監(jiān)護(hù)儀，用Ⅱ?qū)?lián)觀察給藥前的心電圖，然后結(jié)扎氣管并同時按動秒表計時，通過心電監(jiān)護(hù)儀觀察小白鼠心電活動消失時間，即為心肌缺氧時間，以此評價藥物抗心肌缺氧作用。③冠脈循環(huán)實驗對離體豚鼠心臟冠脈流量的影響（Langendorff法）取300g左右豚鼠，擊昏后頸動脈放血，取出心臟低溫洛氏液中排出余血。插入主動脈導(dǎo)管，連接肌張力換能器。穩(wěn)定后，在充氧恒溫恒壓的洛氏液中收集灌流液，測定3min內(nèi)冠脈流量。藥物分組：；；；。經(jīng)動脈插管分別注入種藥物，觀察藥物對離體豚鼠心臟冠脈流量的影響，冠脈流量增加30%以上可以認(rèn)為有擴(kuò)張冠脈作用。毒理實驗研究①急性毒性試驗半數(shù)致死量（LD50）或最大耐受量（MTD）的測定。LD50測定，觀察一次給藥后動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況。MTD測定，以動物能耐受的最大濃度、最大容積的劑量一次或24h內(nèi)2~3次給予小白鼠，觀察不產(chǎn)生動物死亡的最大耐受量，推算出相當(dāng)臨床用藥的倍數(shù)。②長期毒性試驗取Wistar大鼠80只，♀♂各半，隨機(jī)分為四組，安心膠囊設(shè)三個劑量組，另設(shè)一個對照組。如急毒結(jié)果顯示毒性很低可設(shè)二個劑量組。試驗同期為2~3個月，Qd60d。最后一次給藥次日，取2/3的動物處死，作臟器系數(shù)測定、備流學(xué)、血液生化和病理組織學(xué)檢查。余下1/3動物停止給藥，繼續(xù)觀察兩周，了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的遲緩性毒性。檢查項目同上。臨床觀察方案①病例選擇標(biāo)準(zhǔn)a. 診斷標(biāo)準(zhǔn)：按WHO關(guān)于缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)。b. 試驗病例標(biāo)準(zhǔn)：納入病例標(biāo)準(zhǔn)：凡心絞痛發(fā)作每周3次以上，未經(jīng)治療或雖經(jīng)治療而癥狀無改善，并具有下列條件之一者：一是心電圖有缺血樣改變者；二是心電圖正常但心絞痛發(fā)作典型，含服硝酸酯制劑可緩解，可確診為冠心病心絞痛者。排除病例標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)相關(guān)檢查證實為心肌梗塞以及其它心臟疾病、重癥神經(jīng)官能癥、更年期癥候群、頸椎病所致胸痛者；合并中度以上高血壓，重度心肺功能不全，重度心律失常，肝、腎、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)疾病，精神病患者；18歲以下，妊婦或哺乳期婦女，對本藥過敏者。②分組方法：用隨機(jī)數(shù)字表法，將合格的入選病例按入院先后順序隨機(jī)分為兩組，治療組和對照組各50例。③治療方法：治療組給予口服安心膠囊每次2粒（），每日3次；對照組給予口服通心絡(luò)膠囊每次2粒（），每日3次。采用雙盲法給藥（上兩藥分裝同型號、同顏色膠囊），以4周為1個療程。④觀察指標(biāo)：觀察并記錄治療前后患者癥狀（采用Likert scale記分法）、體征、舌脈變化，心絞痛發(fā)作時間、次數(shù)、程度、持續(xù)時間、誘發(fā)原因，硝酸甘油服用量，藥物副作用等；治療前后行心電圖、血脂、心肌酶譜、血液流變學(xué)、血、尿、便常規(guī)檢查及心、肝、腎功能檢查。⑤療效判定標(biāo)準(zhǔn)：主要考核心絞痛、心電圖和硝酸酯制劑停減率等項目。心絞痛、心電圖療效參照1979年上海會議《冠心病心絞痛和心電圖療效評定標(biāo)準(zhǔn)》。⑥統(tǒng)計學(xué)處理：療

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