體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則(編輯修改稿)

　

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)、激素類(lèi)等生物原科。這類(lèi)原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。一般按工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定；若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括：1．外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。2．純度和分子量主要經(jīng)SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測(cè)生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。3．蛋白濃度蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測(cè)。4．效價(jià)效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。5．功能性實(shí)驗(yàn)功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。（二）生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類(lèi)生物原料、主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合2000年版的《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn)：外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無(wú)溶血或異物無(wú)菌試驗(yàn)：將血清直接37℃度放置7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀。總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，蛋白含量不小于32mg/ml。球蛋白含量：取待測(cè)血清1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，%NaCl溶液，至1ml，用Lowry方法測(cè)定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。：外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無(wú)吸潮，無(wú)結(jié)塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，在1826℃時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)不大于15分鐘。1%?。總蛋白含量：用雙縮脲方測(cè)定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為≥95％。總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥95%。BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。：酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4．標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(chēng)（如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度RZ值（OD403nm/OD280nm）。對(duì)于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測(cè)定，均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定，不得隨意變更供應(yīng)商。（三）化學(xué)原材料化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH值、重金屬檢測(cè)、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)龋鶓?yīng)符合《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2000年版）》分析純級(jí)別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。1．無(wú)機(jī)類(lèi)：主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。2．有機(jī)類(lèi)：主要包括有吐溫三羥基氨基甲烷等。：EuDTTA，魯米諾等。EuDTTA純度分析與鑒定：要求EuDTTA各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在96%以上。（四）其他原輔料1．微孔板條外觀：明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無(wú)劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。材質(zhì)：微孔反應(yīng)板條每孔加200?L增強(qiáng)液，用發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)其熒光值，平均本底熒光值≤1500。吸附能力和精密性：用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測(cè)熒光值，CV值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi)CV≤5％,批間CV≤10％。2．其他粘膠紙、鋁箔袋、說(shuō)明書(shū)、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的配置、凍干、分包裝等步驟；并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)保證其質(zhì)量符合規(guī)定。(一)固相載體的制備（因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn)96孔微孔反應(yīng)板為例進(jìn)行描述）1．包被板的準(zhǔn)備準(zhǔn)備經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被板，記錄批號(hào)、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識(shí)。質(zhì)控項(xiàng)目：尺寸，外觀，包裝。2．包被液的配制配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：包被緩沖液配方，pH值，包被物成份。3．包被板的包被包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。質(zhì)控項(xiàng)目：包被體積，溫度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控。4．洗板工作液的配制（按各單位工藝要求，可以不洗板）按配方配制洗板工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：洗板工作液配方，pH值。5．封閉液的配制按配方配制封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目：封閉液配方，pH值。6．洗板和封閉包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后（按各單位工藝要求，可以不洗板），加入封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目：封閉體積，溫度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控。質(zhì)檢項(xiàng)目：封閉前檢驗(yàn)包被均一性。7．抽干封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。質(zhì)控項(xiàng)目：過(guò)程監(jiān)控。8．干燥反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。質(zhì)控項(xiàng)目：溫度，濕度，時(shí)間，過(guò)程監(jiān)控等。9．密封包裝將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑（按各單位工藝要求，可以不放）。質(zhì)控項(xiàng)目：密封性能，標(biāo)示及效期等。10．反應(yīng)板（半成品）檢驗(yàn)對(duì)裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。(二)滴配過(guò)程1．酶結(jié)合物的制備（根據(jù)各產(chǎn)品實(shí)際情況，該步驟可不進(jìn)行）采用常規(guī)過(guò)碘酸鈉——乙二醇法將相關(guān)的抗體（或抗原）標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶（或其他酶），酶標(biāo)記后的抗體（或抗原）應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。質(zhì)控項(xiàng)目：標(biāo)記方法，過(guò)程控制。2．酶結(jié)合物的鑒定(1)功能性實(shí)驗(yàn)將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。(2)穩(wěn)定性將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋?zhuān)M(jìn)行28℃，及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，滴配結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3．酶結(jié)合物稀釋液按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在28℃保存，并于規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：酶結(jié)合物稀釋液配方，pH值。4．酶結(jié)合物工作濃度的滴配取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行滴配。測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到最優(yōu)的酶結(jié)合物工作濃度。5．酶結(jié)合物工作液配制將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗(yàn)，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測(cè)定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測(cè)。6．酶結(jié)合物工作液的分裝按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。7．酶結(jié)合物工作液（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測(cè)定值。(三)校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的制備1．稀釋液按稀釋液的配方配制，存放在2?8℃或20℃保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：稀釋液配方，pH值。2．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的配制校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、WHO標(biāo)準(zhǔn)品或其他級(jí)別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，準(zhǔn)確性、劑量－反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測(cè)定值。3．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品的分裝按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量。4．校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的校準(zhǔn)品、陰/陽(yáng)性對(duì)照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、準(zhǔn)確性、劑量－反應(yīng)曲線線性（定量產(chǎn)品）、質(zhì)控品測(cè)定值。(四)化學(xué)發(fā)光底物的制備1．底物緩沖液按底物緩沖液的配方配制，存放在28℃保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目：底物緩沖液配方，pH值。2．化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的配制分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑質(zhì)控項(xiàng)目：氧化劑和發(fā)光劑配方。質(zhì)檢項(xiàng)目：分裝前檢驗(yàn)，本底、發(fā)光強(qiáng)度。3．化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）的分裝按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物（氧化劑和發(fā)光劑）。質(zhì)控項(xiàng)目：分裝前確認(rèn)試劑名稱(chēng)、批號(hào)、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。4．化學(xué)發(fā)光底物（半成品）檢驗(yàn)對(duì)分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光強(qiáng)度。（五）銪標(biāo)記物的制備針對(duì)不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪DTTA與標(biāo)記生物原料的比例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時(shí)間、標(biāo)記得率的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)等。在實(shí)際操作過(guò)程中要求嚴(yán)格按照SOP進(jìn)行操作（六）凍干各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。（七）分裝、燈檢和貼簽分裝量用減重稱(chēng)量法進(jìn)行測(cè)量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢是目測(cè)檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。（八）包裝根據(jù)試劑盒包裝SOP要求及說(shuō)明書(shū)的要求，以流水線操作形式進(jìn)行包裝。包裝時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查品名、批號(hào)、裝量，認(rèn)真核對(duì)各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1．半成品抽樣檢驗(yàn)人員按試劑的批號(hào)，根據(jù)抽樣申請(qǐng)單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號(hào)標(biāo)記、待檢。2．質(zhì)控品的要求用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰/陽(yáng)性樣品符合率，靈敏度（最低檢出量），特異性，檢測(cè)范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。如無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。3．半成品檢驗(yàn)根據(jù)各個(gè)試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)指標(biāo)一般包括準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、相關(guān)性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對(duì)每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8℃定期作