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物理圖譜的構建策略研究(ppt39)-經營管理-資料下載頁

2026-07-27 20:07本頁面

【導讀】定單個基因或某些感興趣的基因片段，為人類基因組30億個堿基測序打下基礎。構建物理圖譜是人類基因組計劃的重要組成。由于到目前為止末能發明直接對基因。組DNA整體水平進行分析檢測的技術，所以，凡來源于質粒、噬菌體、細菌等可插入或克。隆DNA片段的DNA分子統稱為載體。經過載體重組的外源DNA比其單獨進入。受體細胞的效率提高幾個數量級。胞內準確復制、大量擴增和明確表達。即含有粘性位點的質。復制起始點ori；AmpR為抗性標記基。因；CEN為著絲粒基因；切斷染色體臂。。YAC的主要用途是：YAC克隆重疊群。嵌入及轉基因技術都采用了YAC克隆系統。BAC是F因子與大腸桿菌構建的DNA單拷。DNA(包括HindⅢ和BamHI切點、因此，BAC克隆庫適于創建DNA資。的菌落培養和雜交的BAC克隆DNA文庫的篩選；DNA樣品容易通過相同的電泳。cDNA圖譜也是一種細胞學圖譜，但構成圖譜。基因組中的許多表達序列區域可轉錄mRNA，域，分離出相應的特異性基因。標之間的距離和在染色體上的排列順序。

　　

【正文】 (marker) ? 界標是繪制圖譜的標記工具。構圖方法不同，界標的種類、界標間的距離、圖譜的分辨率也不同。圖譜中的界標包括采用家系分析法構建的遺傳圖譜中的基因。 DNA原位雜交法構建的遺傳圖譜中的 DNA探針，用 RFLP、 MS、SNP等作為標記構建遺傳圖譜中的 DNA多態性。低分辨率的物理圖譜界標有 STS和 cDNA(EST) 。高分辨率的物理圖譜界標：一是基于 STS構圖法 STSs界標；二是限制性酶切指紋法構圖中的限制性酶切位點界標。中國最龐大的下載資料庫 ? (2)作圖單位 ? 根據構圖方法確定。限制性內切酶的酶切片段是物理圖譜的基本單位。以 STS 為路標構建圖譜是以 STS作為基本單位；以堿基構成的終極物理圖譜則以堿基對為基本單位中國最龐大的下載資料庫 ? (3)確定標記順序 ? 確定標記位點相互之間的銜接關系是制作圖譜的主要目的。將全基因組的不同界標單位進行排序的方法包括：限制性酶切指紋排序、重疊連續克隆序列(STC)排序、計算機軟件排序、染色體步查和跳查填補間隙排序等。中國最龐大的下載資料庫 ? (4)具有 DNA可復制系統 ? 除可見圖譜外，其他圖譜的構建均需DNA復制系統。包括 YAC、 BAC 、粘粒、福斯粘粒、 M13 和 P1等載體系統。上述復制系統在組裝 DNA片段的容量、插入外源 DNA后的穩定性、克隆嵌合體以及構建基因文庫所需的克隆數量上均不中國最龐大的下載資料庫二、完整圖譜構建的步驟 ? 分離大片段 DNA ? 從染色體顯帶的低分辨率細胞學作圖到限制酶切指紋、重疊克隆群的高分辨率物理圖譜，分離到的 DNA片段的大小差異很大，可介于 10Mb到 100Kb之間。中國最龐大的下載資料庫大片段 DNA和 DNA ? 把覆蓋一條染色體的 50— 500個大 DNA片段進行排序以構建低分辨率圖譜的排序方法有兩種：一是用兩種不同的限制性內切酶分別切割基因組 DNA，可以產生兩套彼此重疊的 DNA片段，再用適當的探針將相鄰的重疊片段鑒定出來。二是只用一種限制性內切酶產生大片段，再用一套連點探針 (linking probe)與兩個不同的大 DNA片段雜交，由于探針是由酶切大片段產生的小片段制成，含有特定酶切位點順序，所以可確定大段 DNA在基因組中中國最龐大的下載資料庫 ? 克隆間隙的填補方法 — 染色體步查 ? 染色體步查和跳查 (chromosome walking和 chromosome jumping)是尋找重疊克隆和填補克隆群間隙的有效方法。從染色體上的某一位置 (或某一克隆片段 )出發，設法分離得到與其鄰接的 (一側或兩側 )片段，一步一步地或跳過一定序列，根據末端重疊序列將鄰近片段連接起來

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