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2026-04-22 05:36本頁面

　　

【正文】因為無毒，不可燃性且對大多數(shù)蛋白質(zhì)有保護作用。 PEG沉淀法能在室溫下進行，得到的沉淀顆粒較大，收集容易。 ? PEG的分子量需大于 4000，最常用的是 6000和 20 000。所用的PEG濃度通常為 20％，濃度再高，會使粘度增大，造成沉淀的回收比較困難。 PEG對后續(xù)分離步驟，影響較少，因此可以不必除去。但它的存在會干擾 A280和 Lowry法測定蛋白質(zhì)． Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 43 第三章沉淀技術(shù) 優(yōu)點：室溫條件下操作；沉淀的顆粒往往比較大；不容易破壞蛋白質(zhì)活性。缺點：所得的沉淀中含有大量的 PEG Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 44 第三章沉淀技術(shù) ? 其他沉析技術(shù) 一、成鹽沉淀法：蛋白質(zhì)在堿性溶液中帶負電荷，能與金屬離子形成金屬復(fù)合鹽沉淀。常用的金屬離子 Zn2+ 、 Ca2+ 、 Pb2＋：含氮有機酸如苦味酸和鞣酸等能夠與有機分子的堿性功能團形成復(fù)合物而沉淀析出。：磷鎢酸、磷鉬酸等能與陽離子形式的蛋白質(zhì)形成溶解度極低的復(fù)合鹽，從而使蛋白質(zhì)沉淀析出特點：常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的沉淀，應(yīng)用時必須謹(jǐn)慎。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 45 第三章沉淀技術(shù) 二、選擇性變性沉淀法選擇變性沉析法原理是利用蛋白質(zhì)、酶與核酸等生物大分子對某些物理或化學(xué)因素敏感性不同，而有選擇地使之變性沉析，以達到目的物與雜蛋白分離的技術(shù)，稱為選擇變性沉淀。選擇性熱變性選擇性酸堿變性選擇性變性劑 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 46 第三章沉淀技術(shù) 熱沉淀定義在較高溫度下，熱穩(wěn)定性差的蛋白質(zhì)將發(fā)生變性沉淀，利用這一現(xiàn)象，可根據(jù)蛋白質(zhì)間的熱穩(wěn)定性的差別進行蛋白質(zhì)的熱沉淀，分離純化熱穩(wěn)定性高的目標(biāo)產(chǎn)物。適用對象：熱穩(wěn)定性高的蛋白質(zhì) Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 47 第三章沉淀技術(shù) 實例酵母干粉中加入 mol/L磷酸氫二鈉溶液， 37℃水浴保溫 2 h，室溫攪拌 3 h，離心收集上清液，升溫至 55℃ ，保溫 20 min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 48 第三章沉淀技術(shù) 第三節(jié) 沉淀技術(shù)的應(yīng)用蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)（酶）的純化在粗分離階段常用到沉淀技術(shù)，以鹽析、有機溶劑沉淀、多聚物沉淀的應(yīng)用最廣泛。 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 49 第三章沉淀技術(shù) 棉鈴蟲谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶（ glutathione Stransferase， GST）的純化聚乙烯亞胺（ PEI） +硫酸銨 +PEG+親和層析，棉鈴蟲幼蟲中的 GST PEG10000PEG20220(NH4)2SO4 ? 多種沉淀技術(shù)的結(jié)合使用 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 50 第三章沉淀技術(shù) β 甘露聚糖酶（ β mannanase）枯草芽孢桿菌發(fā)酵丙酮沉淀 /(NH4)2SO4/PEG 比較后丙酮最佳 ? 不同沉淀技術(shù)的比較 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 51 第三章沉淀技術(shù) 核酸 ? 核酸的高電荷磷酸骨架（ 3）比蛋白質(zhì)，多糖等更具親水性 ? PEG應(yīng)用于 DNA沉淀已普遍（磷酸緩沖液中 PEG濃度 10%） ? 酚、氯仿抽提后（變性蛋白質(zhì)），乙酸鈉中和磷酸骨架負電荷（降低其親水性，促聚集），乙醇可有效沉淀 DAN（有機溶劑沉淀） ? 分子克隆第三版 Anhui University of Technology and Science Teaching and Research Section Department of Biochemical Engineering 52 第三章沉淀技術(shù) 多糖多糖提取的初級階段多用到乙醇沉淀或乙醇分級沉淀，選擇性沉淀（ TCA）去除多糖中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。教材例子

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