中藥化學35生物堿類化學成分的提取分離技術-文庫吧

【正文】 ?碘 碘化鉀 （ Wagner） KII2 棕褐色，紅棕色 沉淀 ?碘化鉍鉀 （ Dragendoff） BiI3?KI 黃色到橘 紅色 沉淀 ?碘化汞鉀 （ Mayer試劑） HgI2?2KI 類白色 沉淀 若加過量試劑，沉淀又被溶解。 ?硅鎢酸 (Bertrand試劑 )SiO2?12WO3 類白色沉淀 ?苦味酸 (Hager試劑 ) 2,4,6三硝基苯酚 黃色沉淀 ?雷氏銨鹽 (Ammoniumreineckate) 硫氰酸鉻銨試劑 ， 與季銨型生物堿反應生成紅色沉淀或結晶 。 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應 （ 1） 通常在酸性水溶液中生物堿成鹽狀態下進行； （若在堿性條件下則試劑本身將產生沉淀） （ 2） 在稀醇或脂溶性溶液中時，含水量 50%； （當醇含量 50%時可使沉淀溶解） （ 3） 沉淀試劑不易加入多量。 （如：過量的碘化汞鉀可使產生的沉淀溶解） 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應 （ 1） 鑒別時每種 Alk需采用三種以上沉淀試劑； （沉淀試劑對各種 Alk的靈敏度不同） （ 2） 直接對中藥酸提液進行沉淀反應，則 陽性 結果 ， 不能判定 Alk的存在 陰性 結果可判斷無 Alk存在。 氨基酸、蛋白質、多糖、鞣質等 + 沉淀試劑 —— 沉淀 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應 （ 1） 礬酸銨 濃硫酸溶液 （ Mandelin試劑）為 1%礬酸銨的濃硫酸溶液。如遇阿托品顯紅色，可待因顯藍色，士的寧顯紫色到紅色。 （ 2） 鉬酸銨 濃硫酸溶液 （ Frohde試劑）為 1%鉬酸鈉或鉬酸銨的濃硫酸溶液，如遇烏頭堿顯黃棕色，小檗堿顯棕綠色，阿托品不顯色。 （ 3） 甲醛 濃硫酸試劑 （ Marquis試劑）為 30%甲醛溶液 10ml濃硫酸的混合溶液。如遇嗎啡顯橙色至紫色，可待因顯紅色至黃棕色。 四、生物堿的鑒定（二）顯色反應 薄層色譜 吸附劑：硅膠、氧化鋁 展開劑：以苯、氯仿為主 顯色劑： 改良碘化鉍鉀 因硅膠為弱酸性，因此需加堿處理： 1）在濕法鋪板時加一定量的 NaOH溶液，使板呈堿性。 2）在中性展開劑中加入一定量的二乙胺或氨水（如氯仿 二乙胺 9﹕ 5或 9﹕ 1） 3）在層析槽中放一盛有氨水的小杯。 四、生物堿的鑒定（三） 色譜檢識 紙色譜 固定相：水、甲酰胺、酸性緩沖液 高效液相色譜 四、生物堿的鑒定（三） 色譜檢識 一、提取 （一）總生物堿的提取 植物中生物堿的性質和存在狀態決定提取方法。 常用提取方法： ※ 水蒸氣蒸餾法： 用于具有揮發性的生物堿，如 麻黃堿 及液體生物堿。 ※ 升華法： 用于具有升華性的生物堿，如 咖啡因 。 ※ 溶劑法： 用于大多數生物堿。 主要介紹溶劑提取法 第二節 生物堿的提取和分離 1. 水或酸水提取法 原理 ：①利用生物堿鹽易溶于水，難溶或不溶于親脂性有機溶劑的溶解性能，用水進行提取。 ②用酸水提取可使生物堿都以鹽的形式被提出，提高提取率。 常用的酸 ： ％～ 1％的乙酸、硫酸、鹽酸或酒石酸等。 提取方法 ：浸漬法、滲漉法、煎煮法。 此方法的 缺點 是提取液體積大，濃縮困難，水溶性雜質多。 2. 醇類溶劑提取法 原理 ：游離生物堿及其鹽一般都能溶于乙醇和甲醇。 提取方法： 浸漬法、滲漉法、加熱回流（連續回流）提取法。 此方法的 缺點 是含有大量脂溶性雜質。 3. 親脂性有機溶劑提取法 原理 ：利用游離生物堿易溶于低極性有機溶劑，進行提取。 提取方法 ：冷浸法、加熱回流（連續回流）提取法。 此方法的 特點 是 ① 提取前需用堿堿化。 ② 只能提取親脂性生物堿，親水性生物堿不被提出 。 ③ 雜質少，易于進一步純化。 ④ 毒性大，易燃易爆。 （二）水溶性生物堿堿的提取 沉淀法 溶劑法 二、分離 （一）總生物堿的初步分離 （二）生物堿單體的分離 利用生物堿堿性的差異進行分離 即在不同 pH條件下進行分離 —— pH梯度法，有兩種操作： 方法 1 總生物堿 / 酸水溶解 │ │用堿調節 PH由低到高 │每調一次用 氯仿萃取 一次 ┌────┬───┴───┬─────┐ ↓ ↓ ↓ ↓ 氯仿液 氯仿液 氯仿液 氯仿液 PH值： 低 ─────────────────→ 高 得到的生物堿堿度： 弱 ─────────────────→ 強 方法 2 總生物堿 / 氯仿溶解 │ │用不同 pH緩沖酸溶液 依次 萃取 ┌────┬───┴───┬─────┐ ↓ ↓ ↓ ↓ 緩沖液 緩沖液 緩沖液 緩沖液 PH值： 高 ─────────────────→ 低 得到的生物堿堿度： 強 ─────────────────→ 弱 采用 pH梯度法分離前，通常先用 多緩沖紙色譜 法對總堿中各生物堿的堿度強弱作初步了解，據此調節 pH值。 利用生物堿或生物堿鹽溶解度的差異進行分離 生物堿以及生物堿鹽在不同溶液的溶解度存在明顯的差異，可用于分離。 如： 氧化苦參堿 是 苦參堿 的氮氧化物，極性稍大，不溶于乙醚。而苦參堿溶于乙醚，于兩者的氯仿液中加入乙醚，氧化苦參堿即可析出。 如： 麻黃堿 草酸鹽在水中的溶解度比偽麻黃堿草酸鹽的溶解度小，可以自水溶液中先行析出。 某些生物堿特殊功能團（羥基、內酯鍵和內酰胺鍵等）能發生可逆性化學反應，導致其溶解性改變，從而與其他成分分離。 1）酚性堿的分離 2）內酯類和內酰胺類生物堿的分離 H O－ Ar≡N O－ Ar≡N OH （苛性堿） H＋ （氯化銨） 酚鹽（溶于水） （溶于氯仿等）酚性堿 o oN oC O O O HN H2C O O（溶于氯仿等） （溶于水） OH / Δ H+ 利用生物堿的特殊官能團分離 利用色譜法分離 1）吸附柱色譜（常用）常用氧化鋁或硅膠作為吸附劑，以氯仿、苯等為底劑的溶劑系統作為洗脫劑，其中加少量堿性試劑，可改善分離效果。 2）分配柱色譜 例如三尖衫酯堿和高三尖衫酯堿的分離。 3）高效液相色譜法（ HPLC） 這是一種現代高效的分離分析方法。常用 C18反相色譜柱，流動相以甲醇 水、乙腈 水為底劑。 麻黃（ herba ephedrae）為麻黃科草麻黃 (Ephedra sinica Stapf.)、中麻黃 (Ephedra intermedia Schrenk et .)或木賊麻黃 (Ephedra equisetina Bge.)的干燥草質莖。具有發汗解表、宣肺平喘、利水消腫的作用。麻黃中含有多種生物堿 ,因產地和品種的不同有一定的差異 ,一般以麻黃堿和偽麻黃堿為主 ,此外還含少量甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿和去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿。 第三節 應用 一、 麻黃中生物堿類成分的提取分離技術 （一）麻黃中主要有效成分及結構 麻黃中含有多種生物堿，以麻黃堿和偽麻黃堿為主，其次是甲基麻黃堿和去甲基麻黃堿。它們的結構如下： CH OCHC H 3HN H