正文內容

不同類型細胞的培養特點-文庫吧

2025-09-22 02:43 本頁面

【正文】剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養法。肝組織易于貼壁，生長力好，一般次日即可出現生長暈。第十五頁，共七十頁。 2．初代消化法培養： (1) 把肝組織切成 2 ~ 4 立方毫米的小塊，用不合鈣鎂的BSS 液洗兩次； (2) 移入 1:1 的％胰蛋白酶和％膠原酶 (都用無鈣鎂 BSS 配制 ) 中， 4℃ 冷消化 10 ~ 12 小時后，通過 250 微米和 64 微米尼龍網或不銹鋼紗網濾過 (用紗布濾過亦可 )； (3) 收集細胞、 BSS 液洗 1 ~ 2 次、計數、接種培養；第十六頁，共七十頁。 3．肝臟灌流法： ? 需用全肝，以較小動物如小鼠和大鼠為好。 (1) 無菌解剖動物，取出肝臟，先用 BSS 洗除血污； (2) 取 5ml 注射器一支，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中，用線繩結扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統，并不時輕柔壓肝臟，以便消化液進入肝小葉中；消化液在肝內停留 20~ 30 分后，在吸出消化液的同時并輕柔壓肝臟，以使肝細胞脫落和消化液吸出；第十七頁，共七十頁。 (3) 待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心別離，用 RPMI 1640 培養基培養 (較其它培養基為好 )，能獲得較純的肝上皮細胞和獲較好的效果。第十八頁，共七十頁。 (四 ) 內皮細胞培養 ?應用材料：人臍帶臍靜脈、動物大動脈等，用灌流消化法獲取細胞最為簡便。第十九頁，共七十頁。 1. (1)取產后的新鮮臍帶；如不立即培養可保存于 4℃ 中，但不宜超過 12 小時；無菌剪取長 10 ~ 15 厘米一段。 2. 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養； (2) 先用三通注射器吸溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血；注入口處宜用線繩結扎，以防液體返流；第二十頁，共七十頁。 (3) 用血管鉗夾緊臍帶一端，從另端向臍靜脈中徐徐注入最終濃度為％的膠原酶，待末端出現液體后結扎之，令充滿血管，注入口亦應結扎，以防液體返流，消化 3 ~10 分鐘； (4) 吸出含有內皮細胞的消化液，注入離心管中；為獲取更多細胞，可再注入溫 PBS 沖洗 2 ~ 3 次徹底去除干凈剩余細胞，一并注入離心管中離心； (5) 吸除上清，加 1640 培養液，制成細胞懸液，接種入瓶皿中培養，順利時 2 ~ 3 天內細胞即可長成單層。第二十一頁，共七十頁。第二十二頁，共七十頁。 ?人臍帶易于獲得，培養效果好；細胞生長后，一般傳 6 ~ 7 代后即衰退，難以長期維持。用兔血管內皮細胞培養較好，可傳 10 ~ 30 代； ?不同部位血管內皮細胞生物學性狀不同，對各種作用因素反響亦有很大差異。第二十三頁，共七十頁。 (五 ) 毛細血管內皮細胞培養 ?毛細血管細小，結構簡單，內皮細胞外有較多的結締組織，進行別離培養有很大困難。 ?近年毛細血管培養已獲成功； ?利用人的小兒包皮、人脾臟、牛腎上腺、癌組織 (如卵巢癌 ) 等均可；第二十四頁，共七十頁。 1．材料： [腫瘤條件培養基制備 ] (1) 取 C3H 小鼠的 S180 實體肉瘤組織； (2) 胰蛋白酶消化， Dulbecco 改進 Eagle 氏培養液 15m1 (含 10％小牛血清 ) 種到培養瓶中培養；第二十五頁，共七十頁。 (3) 在細胞生長接近完全集合時，收集培養液制成條件培養基；再用含 10％小牛血清的新培養液后，也每隔兩天收集一次，可獲多量條件培養基； (4) 4000 轉／別離心后，再通過微孔濾膜濾過， 20℃ 凍存備用 (臨用前融解 )。 [凝膠底層制備 ] (1) 取 60 mm Falcon 產培養皿，加 1% Difco 產明膠 (用不合鈣和鎂的 Hanks 液配制 )，鋪蓋瓶底，形成薄層； (2) 置 4℃ 過夜；用前再用少許培養液沖洗一次。第二十六頁，共七十頁。 2．初代培養 (1) 取材：取新鮮牛腎上腺數個，先用 Hanks 液洗除血污； (2) 消化：剝除被膜，別離出皮質，切成 l mm3 小塊，加％膠原酶室溫中消化 1 小時；每隔 10 分鐘用吸管吹打懸液令消化充分； (3)過濾：通過不銹鋼紗網濾過，網眼要求只允許能通過小于 110 微米長的毛細血管小段； (4)離心： 650 rpm， 4℃ ，離心 7 分鐘后，棄掉上清膠原酶；第二十七頁，共七十頁。 (5)再離心：沉淀物用培養液重懸并離心，再重懸，再離心，共兩次； (6) 制細胞懸液：末次沉淀物仍用含 10％小牛血清的 Dulbecco 改進 Eag1e 氏培養液重懸后，稍吹打； (7)接種：接種入鋪有明膠底層的培養皿中， 37℃ 培養；在培養頭 1 ~ 3 小時中，毛細血管小段和內皮細胞最先貼附于底物上，而腎上腺細胞和成纖維細胞卻仍在培養液中漂浮； (8)換液：

點擊復制文檔內容

環評公示相關推薦

不同類型細胞的培養特點-文庫吧

不同類型的受賄犯ppt課件-資料下載頁

[精選]不同類型物業管理的公共關系-資料下載頁

不同類型微信公眾號不同的推廣策略-資料下載頁

嘗試情境設計及不同類型學生的發展-資料下載頁

嘗試情境設計及不同類型學生的發展-資料下載頁

物業管理09不同類型物業管理-資料下載頁

淺析不同類型物業的管理與服務-資料下載頁

不同類型的實驗室臺面介紹-資料下載頁

考研政治不同類型試題的回答方法-資料下載頁

不同類型肺水腫的ct表現(2)-資料下載頁

蘇教版化學必修2不同類型的晶體-資料下載頁

不同類型的辭職信怎么寫-資料下載頁

[精選]淺析不同類型物業管理的公共關系-資料下載頁

[工學]不同類型照片如何拍攝-資料下載頁

[精選]不同類型物業管理公共關系-資料下載頁

不同類型細胞的培養特點(完整版)

不同類型細胞的培養特點(更新版)

不同類型細胞的培養特點(專業版)

不同類型細胞的培養特點(留存版)