細胞生物學研究方法-wenkub

　

【正文】 ion electron Microscope TEM） 掃描 電子顯微 電鏡 （ Scanning electron Microscope SEM ） 掃描隧道顯微鏡 名 稱 波 長 (n m) 可見光 760 390 紫外光 390 13 X 射線 13 0. 05 γ射線 1 0. 005 電子束 : 100V 0. 12 3 10 ,0 00V 0. 01 22 10 0, 000V 0. 00 387 各種光及電子束的波長 透射 電子顯微 電鏡 電子顯微鏡與光學顯微鏡的基本區別 顯微鏡 分辨本領 光源 透鏡 真空 成像原理 光鏡 電鏡 200nm 100nm 可見光（ 400700） 紫外光 （約200nm) 電子束 () 玻璃透鏡 玻璃透鏡 電磁透鏡 不要求真空 不要求真空 要求真空 ～ 利用樣品對光的吸收形成明暗反差和顏色變化 利用樣品對電子的散射和透射形成明暗反差 電子顯微鏡的分辨本領與有效放大倍數 電子顯微鏡的分辨率可達 ， 其放大倍數為 100萬倍 。 DIC顯微鏡下的硅藻（偽彩色） 微分干涉差顯微鏡的應用： (Differentialinterference microscope)DIC顯微鏡使細胞的細微結構立體感特別強，適合于顯微操作。 把透過標本的可見光的光程差變成振幅差 ， 從而提高了各種結構間的對比度 ， 使各種結構變得清晰可見 。 放大 1600倍的人類精子細胞 （三）激光共聚焦掃描顯微 鏡 是在熒光顯微鏡成像的基礎上裝有激光掃描裝置，以單色激光作為光源，使樣品被激發出熒光，利用計算機進行圖像處理，從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像的一種光學顯微鏡。 染 色 不染色 激發光 發射光 熒光顯微鏡的種類 透射式 落射式 熒光顯微鏡的在生命科學中的應用： 熒光顯微鏡技術包括免疫熒光技術和熒光素直接標記技術 。 特點： 光源為紫外線 ， 波長較 短 ， 分辨力高于普通顯微鏡； 自發熒光 :由細胞本身存在的物質經紫外線照射所發出的熒光。染料 蘇木精可以將 嗜堿 性結構染成 藍紫色 ，而 伊紅 可以將 嗜酸 性結構染成 粉紅色 。 放大倍數 ＝ 目鏡 的放大倍數 X物鏡 的放大倍數 人眼的分辨能力在 mm左右 ① 固定： 可使生物大分子交聯，蛋白質成分凝固，防止細胞自溶和破壞而產生人工假象。 Chapter 3. Techniques in Cell Biology 第三章 細胞生物學研究方法 艾永興 動物生物技術系 吉林大學動物科學學院 聯系方式： 13804314800 光學顯微鏡技術（ light Microscopy） 電子顯微鏡技術 (Electro microscopy) 掃描探針顯微鏡（ Scanning Probe Microscope） 第一節 細胞形態結構的觀察方法 一 光學顯微鏡技術（ light icroscopy） 復合顯微鏡 ： 現今使用的光學顯微鏡都是由幾個透鏡組合而成，所以又稱為 復合顯微鏡。 常用固定劑： 甲醛、戊二醛、乙醇 ② 包埋： 便于切片，防止樣品移位 ,常用包埋劑：石蠟 ③ 切片： 生物樣品太厚，不能直接用光鏡觀察，需切成 1～10μ m的薄片 ④ 染色 : 蘇木精－ 對負電荷分子有親和力，可顯示細胞內核酸的分布 伊 紅 －可使細胞質染色 光學顯微鏡的樣品制備與觀察 蘇木精 伊紅染色 ，又稱“蘇木素 伊紅染色”，或“ Hamp。嗜堿性結構通常包括含有 核酸 的部分，如核糖體、細胞核及細胞質中富含核糖核酸（ RNA）的區域等。 誘發熒光 :一些細胞成分本身經紫外線照射后不發熒光，但用熒光染料（酸性品紅、甲基綠、吖叮橙等熒光色素）進行活體染色或固定后切片染色，就能在熒光鏡下看見熒光，這種熒光叫誘發熒光。 熒光顯微鏡是目前在光鏡水平對特異蛋白質等生物大分子 定性定位 的最有力的工具 。 WHAT IS CONFOCAL MICROSCOPY ?The resolution of images obtained with conventional microscopy are seriously deteriorated by the contamination of the image plane with outoffocus light WIDEFIELD CONFOCAL 共聚焦掃描顯微鏡的成像基本原理 分辨率可以比普通熒光顯微鏡的分辨率提高 ～ 由于點對點掃描去除了雜散光的影響 conventional confocal 可獲取連續光學切片 優點： 多個（四個） 熒光通道，可同時探測多個被標記物 LCSM Image of a Xenopus Melanophore microtubule cytoskeleton (green) and the nucleus (blue) 2022年的諾貝爾化學獎授予了從事有關“綠色熒光蛋白質的發現 ,表達和發展”并取得重要成就的三位科學家 :下村修、馬丁 （四）相差顯微鏡 用途：觀察未經染色的玻片標本 相差顯微鏡觀察的活細胞 （五）微分干涉差顯微鏡 ? 在相差顯微鏡原理的基礎上發明 ? 其優點是能顯示結構的三維立體投影影像 。目前像基因注入、核移植等生物工程的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。上述放大倍數稱之為有效放大倍數；如繼續通過光學手段放大也不會得到任何有意義的信息 ， 因此稱之為 “ 空放大 ” 。這種切片需要用超薄切片機制作。 切片 :將樣品制成 50～100nm厚的薄片。 分辨率 。 冰凍斷裂技術也是研究細胞內部各種細胞器結構的有用手段 。 噴金 , 90176。 復膜 細胞冰凍斷裂后的電鏡圖像 ? 20世紀 60年代問世，用來觀察標本表面結構。 掃描隧道顯微鏡原理 示意圖 探針和物體之間加上電壓。