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細(xì)胞生物學(xué)研究方法(文件)

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【正文】如 STM在平行和垂直于樣品表面方向的分辨率分別可達(dá) ，即可以分辨出單個(gè)原子，具有原子級(jí)的分辨率。 1924年 svdberg發(fā)明了世界上第一臺(tái)分析超速離心機(jī)。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。 ?常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。原理 : 標(biāo)本經(jīng)稀鹽酸水解后， DNA分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的一端出現(xiàn)了醛基。 Electron micrograph of a cell showing the location of a particular enzyme (nucleotide diphosphatase) in the Golgi apparatus. A thin section of the cell was incubated with a substrate that formed an electrondense precipitate upon reaction with the enzyme 脂類物質(zhì)包括脂肪和類脂。 2．脂類顯示方法二十世紀(jì) 70年代以來，免疫學(xué)的迅速發(fā)展為細(xì)胞生物學(xué)的研究提供了強(qiáng)有力的手段，特別是在細(xì)胞內(nèi)特異蛋白的定位與定性方面，單克隆抗體與其它一些檢測(cè)手段相結(jié)合發(fā)揮了重要作用。 ?間接法 ?直接法將帶有標(biāo)記的抗體與抗原反應(yīng) ，顯示出抗原存在的部位在抗體抗原初級(jí)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，再用帶標(biāo)記的次級(jí)抗體與初級(jí)抗體反應(yīng) ，從而使初級(jí)反應(yīng)得到放大，增強(qiáng)顯示效果 Antigen presenting Cell Enzymeconjugated Primary Antibody Substratechromogen solution ?直接法將帶有標(biāo)記的抗體與抗原反應(yīng) ，顯示出抗原存在的部位間接免疫細(xì)胞化學(xué)法的原理示意圖次級(jí) 抗體初級(jí) 抗體標(biāo)記物第一抗體（一抗）第二抗體（二抗） Primary Antibody Enzymeconjugated Secondary Antibody Antigen presenting Cell Substratechromogen solution 間接法（一）免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù) 就是將免疫學(xué)方法（抗原抗體特異結(jié)合）與熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合用來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。它主要包括熒光抗體的制備，標(biāo)本的處理，免疫染色和觀察記錄等過程。當(dāng)用免疫球蛋白包被膠體金后則稱為免疫金，是一種在光鏡或電鏡下易辨認(rèn)的標(biāo)記物。這稱為間接免疫法。（ 2）免疫電鏡技術(shù) 體外培養(yǎng)的 BHK21細(xì)胞經(jīng)選擇性抽提后用抗 280kD核骨架蛋白抗體進(jìn)行免疫膠體金標(biāo)記的結(jié)果 IF：中間纖維； g：金顆粒； N：核區(qū)。熒光原位雜交 (fluorescence in situ hybridization,FISH): FISH技術(shù)的原理圖解放射性同位素發(fā)射出的各種射線能使照相乳膠中的鹵化銀晶體還原 (感光 )。下面介紹二種細(xì)胞化學(xué)的定量分析方法。前者是利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對(duì)紫外光某波段特有的吸收曲線來檢定相應(yīng)物質(zhì)的含量；后者則是根據(jù)某種物質(zhì)特異的染色反應(yīng) ，然后再測(cè)定其對(duì)可見光某特定波段的吸收能力來進(jìn)行對(duì)該物質(zhì)的定量測(cè)定。一細(xì) 胞培養(yǎng) （一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) （二）植物細(xì)胞培養(yǎng) 第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng) 、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù) 細(xì)胞培養(yǎng) 就是將動(dòng)植物組織或細(xì)胞從機(jī)體取出，分散成單個(gè)細(xì)胞或直接以單細(xì)胞生物，給予必要的生長(zhǎng)條件，讓其在培養(yǎng)瓶中或培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)與增殖。適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞傳代培養(yǎng) ：細(xì)胞株 :通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。如果細(xì)胞能連續(xù)傳代培養(yǎng)的，稱為連續(xù)細(xì)胞系（ continuous cell line）。接觸抑制和密度依賴性實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源 3T3 胚胎成纖維細(xì)胞小鼠 HeLa 宮頸癌上皮細(xì)胞 Henrietta Lacks BHK21 成纖維細(xì)胞敘利亞倉(cāng)鼠 PtKl 上皮細(xì)胞袋鼠 L6 成肌細(xì)胞大鼠 PCI2 嗜鉻細(xì)胞大鼠 SP2 漿細(xì)胞小鼠 SP2／ 0 骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠 CHO 卵巢細(xì)胞中國(guó)地鼠 Hela細(xì)胞（左）、 CHO細(xì)胞（右）的培養(yǎng) 正常細(xì)胞培養(yǎng) 的世代數(shù)有限，只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無限生長(zhǎng)下去。（一）細(xì)胞融合的概念細(xì)胞融合（ cell fusion）又稱細(xì)胞雜交（ cell hybridization）是指在自然條件下或人工方法（物理，化學(xué)，生物等方法）將不同種生物或同種生物不同類型兩個(gè)或多個(gè)真核細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的生物學(xué)現(xiàn)象和過程。動(dòng)物細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合過程細(xì)胞融合可分為４個(gè)過程：１ .細(xì)胞的接觸２ .細(xì)胞質(zhì)膜的融合３ .細(xì)胞質(zhì)的重組４ .遺傳物質(zhì)的選擇細(xì) 胞融合過程許多病毒都具有凝集動(dòng)物細(xì)胞并促使凝集的動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生融合的能力。hler 德國(guó) 巴塞爾免疫研究所 1946年 1995年米爾斯坦 C233。如細(xì)胞含有此兩種酶則可啟動(dòng)補(bǔ)救途徑。脾細(xì)胞 (B淋巴細(xì)胞 ) 骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞脾細(xì)胞 /?脾細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞 / ?骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞脾細(xì)胞不能長(zhǎng)期存活不能長(zhǎng)期存活單克隆抗體制備示意圖三細(xì)胞拆合及顯微操作技術(shù) 細(xì)胞拆合方法：可以分為物理法和化學(xué)法兩種類型。由于核體外表包有一層細(xì)胞膜和少量胞漿，因而在 PEG或仙臺(tái)病毒的介導(dǎo)下，核體可同另一胞質(zhì)體融合，形成重組細(xì)胞。顯微操作儀現(xiàn)在顯微操作裝置的設(shè)計(jì)越來越精密，已經(jīng)有可能對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行解剖和注入微量物質(zhì)（如核酸分子片段）。顯微操作技術(shù) micromanipulation technique ? 在倒置顯微鏡下利用顯微操作器進(jìn)行細(xì)胞或早期胚胎操作的一種方法。這種核移植必須用顯微操縱儀進(jìn)行操作。 T, 胸腺嘧啶 H T 外源性途徑 (旁路途徑 ) DNA 內(nèi)源性途徑 (主要途徑 ) 糖和氨基酸二氫葉酸還原酶胸腺嘧啶激酶 ( TK ) (Thymidine kinase) 外源性途徑 (旁路途徑 ) A A, 氨基喋呤。脾細(xì)胞

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2026-04-25 12:01

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2026-05-03 01:19

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2025-12-23 08:07

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