基因診斷與基因治療培訓教程(留存版)

　　

【正文】 擴增后用該限制酶切割 PCR產物，根據電泳后酶切片段長度變化，即可作出診斷。RFLP）錄（三） 單鏈構象多態性分析（ singlestrand錄目 with等位基因特異性寡核苷酸改變了傳統雜交方法中一次雜交只能檢測一種樣品的局限，大大提高了基因診斷的效率 。blotting）RNA經變性瓊脂糖凝膠電泳后，轉移到固相支持物上，通過分子雜交檢測特定的 mRNA分子的含量與大小。錄n 免疫組織化學診斷 錄目 錄目 錄第一節 基因診斷學基礎Basis of Gene Diagnostics目 基因診斷檢測的目標分子是 DNA、RNA，也可以是蛋白質或者多肽。n DNA序列測定（ DNA錄目 blotting）6.目 熒光定量 PCR熒光標記引物目 DNA序列測定（ DNA錄目 RFLP（基于核酸分子雜交技術）② SNP(single錄一、血紅蛋白病（ hemoglobinopathy） 目 錄目 2： bA/錄二、血友病（ Hemophilia）n 甲型血友病是由于血漿凝血因子 VIII（FVIII）缺陷造成。錄目 抑癌基因 DPC4和MADR2也可能會因 18q等位基因丟失而失活。二、常見腫瘤的基因診斷目 一、 DNA指紋與多態性遺傳標記目 錄目 2． DNA指紋圖與親權鑒定 目 定義： 指將特定的目的基因導入特定細胞，通過定位重組，導入的正常基因，以置換基因組內原有的缺陷基因。interference） 定義： 采用特定的方式抑制某個基因的表達，或者通過破壞某個基因的結構而使之不能表達，以達到治療疾病的目的。目 能合成包裝蛋白，用于反轉錄病毒載體包裝，但本身卻不能包裝成輔助病毒顆粒。錄宿主細胞范圍廣，可感染分裂和非分裂終末分化細胞，如神經元等。 快的細胞，導入的重組病毒載體，隨分裂而丟失的機會增多，表達時間相對較短。DNAREP：病毒復制基因 ,AAV載體是目前正在研究的一類新型安全載體，它對人類無致病性。（ 1）脂質體介導的基因轉移技術受體介導轉移技術示意圖目 1.錄（三）干擾 RNA interference， 目 RISC)。體外化學合成 。n 苯丙酮酸尿癥和其他先天性代謝缺陷病 錄自殺基因治療基本原理： 向腫瘤細胞內導入某些真核細胞中不存在的酶基因（自殺基因），這些基因表達的特異性酶可以催化對真核細胞無毒或低毒的藥物前體，轉變為具有抑制核酸合成效應的抗代謝藥物，進而選擇性地使轉染了 “自殺基因 ”的腫瘤細胞 “自殺 ”。目 錄目 錄目 三月 21三月 2113:18:5913:18:59March 22, 20231意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 三月 211:18 下午 三月 2113:18March 22, 20231業余生活要有意義，不要越軌。 三月 21三月 21Monday, March 22, 2023很多事情努力了未必有結果，但是不努力卻什么改變也沒有。 腺苷酸合成酶等基因，導入細胞并持續表達，可以激活核酸酶 F， 降解病毒 RNA。 臨床上對絕大多數病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段，在眾多開展的抗病毒治療方案中，抗病毒基因治療十分引人注目。細胞內氧化和解毒作用的酶系統：目 目 激發機體腫瘤免疫效應或提高免疫效應細胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。腫瘤的免疫基因治療藥物增敏基因治療； 錄研究基因功能的新工具 與一般的反義 RNA相比，核酶具有較穩定的空間結構，不易受到 RNA酶的攻擊。錄目 錄（二）核酶 (ribozyme) 受體介導的反義 RNA基因治療有其自身的優點，而在一定程度上補充了轉基因治療的不足。目 將 DNA與細胞或組織親和性的配體偶聯，可使 DNA具有靶向性。ofl 靶向性差。錄p LTR由 U R和 U5三部分組成。錄反轉錄病毒的結構及生活周期（ 1）反轉錄病毒 目 HSV） Ⅰ 型胸苷激酶（ thymidine類型 :n 在有缺陷基因的細胞中導入相應的正常基因，而細胞內的缺陷基因并未除去，通過導入正常基因的表達產物，補償缺陷基因的功能；n 向靶細胞中導入靶細胞本來不表達的基因，利用其表達產物達到治療疾病的目的。replacement） 錄親權鑒定與 DNA指紋圖由此圖可推斷出： A和 C是親生女兒； B為妻子和其前夫所生； D為養女。PI值表示爭議父作為親父比隨機男人作為親父的可能性大多少倍， PI值大于 1表示傾向肯定父子關系，數值越大，可能性越大；等于0時表示排除父子關系 。n 以往在刑事案件的法醫學鑒定中應用的是血型、血清蛋白型、紅細胞酶型和 HLA分型，個體分辨能力不夠，只能排除，不能做到統一認證。length repeat， TR）組成， TR的核心序列同源性很高，等位 HVR的長度由于 TR的重復次數不同而有很大的差別，具高度多態性。bp長，稱為小衛星 DNA。DCC（ deletioncoli）是結腸癌發生過程中第一個突變基因。在癌發展過程的不同階段發生不同的基因突變。錄目 （ 1） PCRSSCP分析技術錄目 n 男性和女性攜帶者增多到 52～ 200拷貝，相鄰的 CpG kb三種帶型。bp片段及分子量標準中低于 200DNA/Msp錄目 GAAGGAG三、脆性 X綜合征 ——RFLP 標記的連鎖分析HapⅠ13kbSouthern印跡雜交N H PN：正常； H：雜合子； P：患者（純合子）；黃色區域為探針目 STR基因表達異常的檢測錄基因診斷中常用的分子生物學方法比較方法 優點與問題 解決方案核酸分子雜交 結果可靠但操作繁瑣 選擇合適的探針 PCR 靈敏度、特異性高 設計合適的引物 SSCP 操作簡便、檢出率不高 選擇合適的片段 RFLP 結果可靠但限制較多 選擇合適的限制酶 DNA測序 可自動化，但不適宜廣泛使用 與 PCR配合使用生物芯片 效率高，成本高，不適宜廣泛使用選擇合適的芯片目 錄A B C D E F G－＋DEFBGCAGAATTCCTTAAGEFBG－ ＋C +DAEcoR目 目 polymorphism,錄1.錄目 錄熒光原位雜交（ FISH）目 oligonucleotide,錄將 RNA或 DNA變性后直接點樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，用于基因組中特定基因及其表達產物的定性及定量的研究。blotting)目 錄（一）核酸分子雜交 Nucleichybridization） YW用核酸分子雜交技術首次對一例 α地中海貧血進行診斷。目 目 n 聚合酶鏈式反應 (PCR)acid錄目 目 ASO）目 錄目 SSCP）錄目 錄PCRSSCP分析原理示意目 錄目 Ⅰ 限制性內切酶位點的變化目 錄目 多在進化中形成，本身并不致病，只是與某些遺傳性致病基因有一定連鎖關系。(short錄目 目 AAGTCT錄1.I。bp的片段太小，在 ％的瓊脂糖凝膠中不易被觀察到（二） ?珠蛋白生成障礙性貧血癥目 在一些重型甲型血友病家系中還有其他異常帶型出現。島未被甲基化，稱為前突變（ premutation）。錄三、寄生蟲及衣原體感染n 瘧原蟲 錄（二）結腸癌 Kras原癌基因突變也是結腸癌形成的早期事件。of重復單位 2～ 6目 polymorphism,目 目 多位點 VNTR系統和 DNA指紋圖的電泳分離后片段數目較多，各等位基因頻率分布的計算復雜，進行親權鑒定和個體識別時匹配概率的計算影響因素較多，目前尚無一個公認的最合理的計算方法。 目 kinase,錄p 兩端各有一長末端重復序列 LTR。p 病毒有三個結構基因p 5ˊ端 LTR下游有一段病毒包裝所必需的序列（ ψ）及剪接供體位點 (SD)和剪接受體位點 (SA)。l gag基因，編碼核心蛋白和屬特異性抗原；l pol基因，編碼反轉錄酶；l env基因，編碼病毒外殼或包膜糖蛋白 (包括外膜糖蛋白和穿膜蛋白 )。—— 由兩部分組成反轉錄病毒載體： 其基因組為缺陷型，保留了病毒的包裝信號 ψ，而缺失病毒的包裝蛋白基因；它可以克隆并表達外源治療基因，但不能自我包裝成有增殖能力的病毒顆粒。② 反轉錄病毒結構基因 gag、 env和 pol的缺失不影響其他部分的活性。④ 包裝好的假病毒顆粒（攜帶目的基因的重組反轉錄病毒載體）以出芽的方式分泌至輔助細胞培養的上清液中，易于分離制備。隨機整合，有插入突變、激活癌基因的潛在危險； AAVAAV可以高效定點整合至人 19號染色體的特定區域 ，并能較穩定地存在。這種偶聯通常通過多聚陽離子（如多聚賴氨酸）來實現。反義 RNA的關鍵技術問題?反義 RNA進入靶細胞前的降解問題?專一性轉移問題 錄錄目 更重要的是，核酶在切斷 mRNA后，又可從雜交鏈上解脫下來，重新結合和切割其它的 mRNA分子。（ 1）小干擾性 RNA（ siRNA）（ 2） siRNA與細胞內的某些酶和蛋白質形成復合體，