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基因表達和基因重組(編輯修改稿)

2026-01-25 17:44 本頁面

　

【文章內容簡介】能的關系研究某基因與疾病的關系按照人的愿望設計和建造非天然的基因表達體系。某功能蛋白宿主細胞重組體目的基因 cDNA：經反轉錄合成的、與 mRNA互補的 DNA鏈。基因組 DNA：代表一個細胞或生物體整套遺傳信息的所有DNA序列。（四）基因載體定義：為攜帶目的基因，實現其無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些 DNA分子。克隆載體 (cloning vector)為使插入的外源 DNA序列被擴增而特意設計的載體。表達載體 (expression vector)為使插入的外源 DNA序列可轉錄翻譯成多肽鏈而特意設計的載體。常用載體質粒 DNA、噬菌體 DNA、病毒 DNA 宿主細胞基因載體載體的選擇標準 ? 能自主復制； ? 具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定； ? 有克隆位點（外源 DNA插入點）即多個單一酶切位點； ? 分子量小，以容納較大的外源 DNA。存在于細菌染色體外的小型環狀 DNA分子。具有自我復制功能。帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標記物。經改造后具有多克隆位點。舉例： pBR322質粒質粒宿主細胞 ori 抗 Amp 宿主細菌含 Amp培養基多克隆位點 + 多種酶切口多克隆位點限制性內切酶單一酶切口多克隆位點 ori 復制起始點遺傳標記 Amp polylinker 基因載體 λ噬菌體 DNA改造系統 λgt系列（插入型，適用 cDNA克隆） EMBL系列（置換型，適用基因組克隆）噬菌體 (phage) M13噬菌體 DNA改造系統（含 lacZ基因） M13mp系列 pUC系列粘性質粒 (cosmid) 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome, YAC) 細菌人工染色體 (bacterial artificial chromosome, BAC) 動物病毒 DNA改造的載體（如腺病毒，腺病毒相關病毒，逆轉錄病毒）其他二、重組 DNA技術基本原理基本原理目的基因的獲取 DNA導入受體菌外源基因與載體的連接克隆載體的選擇和構建重組體的篩選克隆基因的表達以質粒為載體的 DNA 克隆過程（一）目的基因的獲取 1. 化學合成法要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產物的氨基酸序列。 DNA文庫 (genomic DNA library) 3. cDNA文庫 (cDNA library) 4. 聚合酶鏈反應 (polymerase chain reaction, PCR) （見第 22章） * 化學合成法獲取目的基因由已知氨基酸序列推測可能的 DNA序列組織或細胞染色體 DNA 基因片斷克隆載體重組 DNA分子含重組分子的轉化菌限制性內切酶受體菌基因組 DNA文庫存在于轉化細胞內由克隆載體所攜帶的所有基因組 DNA的集合 * 從基因組 DNA文庫獲取目的基因 cDNA文庫以 mRNA 為模板，利用反轉錄酶合成與 mRNA互補的 DNA，再復制成雙鏈 cDNA，與適當載體連接后轉入受體菌，即獲得 cDNA文庫。 DNA mRNA mRNA 反轉錄酶 cDNA mRNA的提取與純化從 mRNA制備 cDNA 逆轉錄酶ＤＮＡ聚合酶 mRNA cDNA 雜化雙鏈 cDNA文庫法

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