免疫學及免疫學檢驗標記技術(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 淀線或沉淀峰，在紫外線照射下發出強烈熒光 免疫學及免疫學檢驗 第二節 免疫熒光顯微技術 基本原理 ：使熒光抗體與標本切片中組織或細胞表面的抗原進行反應，洗滌除去游離的熒光抗體后，于熒光顯微鏡下觀察，在黑暗背景上可見明亮的特異熒光 。 免疫學及免疫學檢驗 直接法 熒光抗體染色 免疫學及免疫學檢驗 直接法 優點：操作簡便、特異性高、非特異 熒光染色因素少， 缺點：靈敏度偏低，每檢查一種抗原需制備相應的特異熒光抗體 免疫學及免疫學檢驗 間接 法 免疫學及免疫學檢驗 間接法 優點：靈敏度高，在不同抗原的檢測中只需應用一種熒光抗體。既可檢測抗原，也可檢測抗體。 免疫學及免疫學檢驗 免疫熒光技術在醫學檢驗中的應用 ? 在細菌學檢驗中主要用于菌種的鑒定。 ? 免疫熒光用于梅毒螺旋體抗體的檢測是梅毒特異性診斷常用方法之一。 ? 用熒光抗體染色法可檢出病毒及其繁殖情況。 ? 在寄生蟲感染診斷中，間接免疫熒光試驗（ IFAT）是當前公認的最有效的檢測瘧疾抗體的方法。 免疫學及免疫學檢驗 ? 免疫熒光法還是檢測自身抗體的好工具，在自身免疫病的實驗診斷中應用廣泛。其突出優點是能以簡單方法同時檢測抗體和與抗體起特異反應的組織成分，并能在同一組織中同時檢查抗不同組織成分的抗體。 ? 熒光抗體技術的一種特殊應用是流式細胞分析（ flowcytometry）?？捎糜跈z測細胞大小、折散率、粘滯度等，更常用于 T細胞亞群等的檢測。 免疫學及免疫學檢驗 第十章 酶免疫技術 免疫學及免疫學檢驗 第一節 酶免疫技術概述 基本原理 利用酶催化底物反應的生物放大作用 ,提高特異性抗原 抗體免疫學反應的檢測敏感性的一種標記免疫技術。 免疫學及免疫學檢驗 基本特點： ①標記后保留酶和抗原 (抗體 )的活性 ②酶促反應專一性，保證特異性 ③底物反應放大作用，提高敏感性 ④酶標試劑保存穩定 ⑤操作簡便，安全易行 免疫學及免疫學檢驗 主要試劑的制備與要求 免疫學及免疫學檢驗 一、酶與酶作用底物 （一）用于標記酶的要求： ? 酶活性高 ? 標記后酶活性穩定，且不影響標記抗原與抗體的免疫反應性 ? 酶催化底物后信號易判定或測定 ? 酶活性不受樣品中其他成分的影響 ? 酶、輔助因子及底物理化性質穩定，安全無害，價廉 免疫學及免疫學檢驗 （二）常用酶及其底物 （ HRP） 常用底物： ? 鄰苯二胺（ OPD）：反應顯橙黃色，應避光，致癌性 ? 四甲基聯苯胺（ TMB）：反應后呈藍色，無需避光，無致癌性，但水溶性差。 免疫學及免疫學檢驗 免疫學及免疫學檢驗 2. 堿性磷酸酶（ AP） 常用底物為對硝基苯磷酸酯（ pNPP），產物為黃色。 * AP靈敏性高與 HRP，但不易獲得純品，穩定性及酶標記物收率 低于 HRP，且價高，故應用不如 HRP普及。 免疫學及免疫學檢驗 二、酶標記抗體或抗原 ? 基本要求： 酶標記抗原純度要高，抗原性完整；抗體的特異性好，效價高，親和力強，比活性高以及易于批量生產和分離純化 免疫學及免疫學檢驗 ? 酶標記方法 以雙功能交聯劑為“橋”，分別與酶和抗體（抗原）連接形成結合物。如戊二醛交聯法。 用過碘酸鈉活化酶蛋白分子后，再與抗體（抗原）結合。僅適用于含糖蛋白分子的酶（如 HRP）標記物制備。 免疫學及免疫學檢驗 三、固相載體 ? 基本要求 結合容量高，結合穩定；可與抗原抗體復合物等大分子蛋白結合；生物大分子固化后仍保持活性；固化方法簡便易行、快捷經濟。 免疫學及免疫學檢驗 ? 固相載體的種類與選擇 材料經濟，操作簡便，易于自動化，最常用。 結合容量大，反應迅速，逐漸普遍用于自動化分析。 硝酸纖維素膜（ NC）、尼龍膜等微孔濾膜，廣泛應用于定性或半定量的斑點 ELISA。 免疫學及免疫學檢驗 四、免疫吸附劑 原理：非共價鍵吸附或共價鍵化學偶聯（包被）。 一般采用偏堿性（ ）的碳酸鹽溶液（ ELISA板）。 封閉： 1％－ 5％牛血清白蛋白或 5％－ 20％小牛血清。 免疫學及免疫學檢驗 酶免疫技術的分類 酶免疫組化 用于檢測組織切片或細胞涂片中的抗原和抗體 酶免疫技術 均相酶免疫測定 酶免疫測定 固相酶免疫測定 異相酶免疫測定 （ ELISA） 液相酶免疫測定