xxxx427中藥質量標淮的研究講義doc-資料下載頁

　　

【正文】 種苷類成分藥味較多，也可測正丁醇浸出物。溶劑的選擇應有針對性，能達到控制質量的目的，一般不采用水或乙醇，因其溶出物量太大，某些原料或工藝的影響難于反映質量的差異。⑨，間接控制成藥質量。2含量測定方法含量測定方法很多，常用的如經典分析方法（容量法、重量法）、比色法、分光光度法、計算分光光度法如二波長、三波長紫外分光光度法、導數(shù)光譜法等（因其雜質并非恒定，所以計算公式只適用于同批樣品，有時不具重觀性，故只適合于內控應用）、氣相色譜法、高效液相色譜法、薄層掃描法、薄層一分光光度法或比色法以及生物測定法等等。含量測定是質量標準的核心部分，它是質量控制中最能有效考察產品內在質量的項目，也是藥品穩(wěn)定性考察最重要的依據(jù)。因此，含量測定方法的建立也是質量標準中的難點與重點。（1）實驗設計：儀器分析方法為因素 A前處理方法為因素 B（2）供試品溶液的制備（3）色譜條件及測定法新藥可以引用藥典或文獻收載的與其相同成分的測定方法，但因品種不同。一般考察項目如下：（1）提取條件的選定 優(yōu)選提取條件對測定結果有直接影響、持別對于制劑中含有藥材原粉的，即由組織細胞中提出有關成分，提取方法的選擇尤為關鍵，常見的提取方法有冷浸、熱浸回流、索氏提取器提取、超聲波提取等，濾除殘渣即得提取液。對提取液的取舍一般有兩種方法，一種為取全量，即充分洗凈殘渣，并將洗滌液合并于提取液中；另一種為取一定量，即在提取前精密加入定量溶劑，稱重，搖勻，過濾，最后結果按相當?shù)臉悠妨坑嬎悖吹谩Ｌ崛l件的確定，一般要有不同溶劑、不同提取方式、不同時間以及不同溫度、PH值等條件比較而定，可參考文獻，再配合回收率試驗或與經典方法比較，從而估計方法的可靠性。（2）分離純化 根據(jù)被測成分的性質，采用一定方法，排除干擾物質，使供試樣品達到定純凈度。特別是氣相、液相色譜分析更應注意此點，以提高分析準確性并可保護色譜柱。（3）測定條件的選擇 如比色法、高效液相、薄層掃描法中最大吸收波長的選擇，液相色譜法中固定相、流動相、內標物的選擇，薄層掃描法層析與掃描條件的選擇等。（4）空白試驗 在色譜法中常用陰陽對照法，即以被測成分或藥材與除去該成分或該藥材的成藥作對照，可考察被測成分的斑點（或峰）位置是否與干擾組分重迭，以確證測定指標（如吸收度、蜂面積）是否僅為被測成分的響應，防止假陽性的誤判。紫外分光光度法或比色法中的空白對照液常見的有溶劑空白、試劑空白（溶劑加顯色劑）。對單一成分或大類成分測定，均須做此試驗。（5）樣品濃度與響應值樣品濃度與吸收度或色譜峰面積（或峰高）之間的線性關系考察、即標準曲線的制備。紫外分光光度法或比色法須制備標準曲線，用以確定取樣量并計算含量。色譜法一般均采用對照品比較法如外標法或內標法測定，但也必須進行線性考察，目的有三：；，即適用的樣品點樣或進樣量的確定；，以確定是以一種或二種對照品量（即一點法或二點法）測定并計算。（6）測定方法的穩(wěn)定性實驗 此項考察目的是選定最佳的測定時間范圍。用紫外分光光度法、比色法或薄層掃描法等測定時，應對被測液或薄層色譜斑點的吸收度值穩(wěn)定性進行考察，即每隔一定時間測定一次，延續(xù)34小時，視其是否穩(wěn)定，以確定適當?shù)臏y定時間。（7）精密度試驗 如氣相、液相色譜法對同一供試液多次進樣測定，簿層掃描法對同一薄層板及異板多個同量斑點掃描測定，可考察其精密度，對同一薄層斑點連續(xù)進行多次測定，則可考察儀器精密度。（8）重復性試驗 按擬定的含量測定方法，對同一批樣品進行多次測定（平行試驗至少5次以上，即namp。gt。5），計算相對標準偏差（RSD），一般要求低于5%。同一人測定多次稱重復性，不同人或實驗室測定稱再現(xiàn)性。（9）檢測靈敏度及檢測下限的測定， 分析方法的靈敏度般以工作曲線的斜率表示。色譜法的靈敏度可以用峰高（mm）/對照品量（mg）表示。最小檢出量即檢測下限，一般按經驗法設計數(shù)個不同進樣量，以目測估計最小儉出量。有時常把最小檢出量理解為靈敏度，實際上兩者概念不同。（10）回收率試驗 含測方法的建立，多以回收率估計分析的誤差和操作過程的損失，以評價方法的可靠性。回收率實驗設計也有多種，在中成藥分析中常見的有以下幾種；①加樣回收，即于已知被測成分含量的成藥中再精密加入一定量的被測成分純品，依法測定。用實測值與原樣品中含測成分之差，除以加入純品量計算回收率。此法不用制備空白對照，模擬真實性好。對單味藥材的回收率測定，因不易制備除去被測成分的藥材空白對照品，只能用加樣回收法，如用提凈被測成分的藥渣作空白，則意義不大，因為在除去被測成分的同時，干擾成分也被除去了。在加樣回收實驗中首先須注意純品的加人量與取樣量中被測成分之和必須在標淮曲線線性關系范圍之內；外加純品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。一般加入量與所取樣品含量之比控制在1：1左右。對于加樣回收的計算方法，也有用實測值除以理論總量（樣品中所含被測成分量與加入純品旦之和）計算的，但仍以前述計算方法為公認。②以成藥空白（即除去欲測藥材后制成的成藥），精密加入被測化學成分純品，依法測定。以加入純品量為理論值，由實測值計算回收率。此法理論值較準確，但其不足是缺少成藥中被測藥材本身的雜質干擾條件，模擬真實性差，特別是被測藥材組分復雜，如人參被測成分為人參皂苷Re、因與該成分共存的同系物或類同成分人參皂苷較多，其自身分離度重現(xiàn)性差，而只以加入純品測定回收率，與人參皂苷Re的干擾情況則無從反映。故此種回收率測定只能用于被測藥材成分較為單一者。③取成藥空白，精密加人已知被測成分含量的藥材，依法測定。以加入藥材所相當?shù)谋粶y成分量為理論值，再由實測值除以理論值計算回收率。此法模擬真實性好，能反映被測藥材中其它成分的干擾情況，但由于已知含量藥材也是同法測得的平均值，故其理論值實際包括正負誤差在內，有時也能掩蓋系統(tǒng)誤差。特別是單味原料（藥材）制劑，仍以采用加樣回收法為宜。回收率試驗至少需進行5次試驗（n＝5），或三組平行試驗（n＝6），在同一批樣品中加入相同或不同純品量，后者可進一步驗證測定方法中取樣量多少更為合適。回收率一般要求在95～105%，一些方法操作步驟繁復，可要求略低至少不小于90%。4含量測定方法實驗設計中應注意的幾個問題（1）提取問題 對含藥材原粉的制劑，如采用取部分提取液的測定方法，不宜將樣品粉末直接置容量瓶中定容，因為中藥含量測定的取樣量往往較大，且藥粉不溶于水，其固體體積不可忽視。，以刻度吸管加入溶劑約7mL即已至量瓶刻度。可將樣品稱人具塞錐形瓶中，精密加入溶劑10m1計算全量。（2）測定大類成分如總黃酮、總皂苷等問題①如所測總成分以某一單體成分為對照品制定標推曲線并計算，應首先考慮對照品溶液與供試品溶液最大吸收波長是否一致，有的相差很大或供試品溶液根本無最大吸收，方法則不能成立。②陰性（空白）對照液即除去欲測成分的藥材原料制備的樣品液，依法測定其吸收圖譜，與基線吻合，或略有吸收，在無其它方法可循的情況下，其吸收值若低至樣品吸收值5%以下可忽略不計。因考察中藥多為天然藥物，含量幅度較大，又為大復方，不可認為無吸收峰即視為無干擾。③按上述方法制備背景空白以消除干擾是不可行的。，＝。由于處方原料不相同，工藝未知，配制出的背景空白不可能條件相同，吸收值差異較大，故此方法無推廣價值。只有在原料來源不變，工藝穩(wěn)定的情況下作為企業(yè)內部的質控方法暫時使用。④為了消除其它組分干擾，采用導數(shù)光譜或二波長，三波長等方法測定單一或大類成分，僅可用于藥味較少的制劑，其空白試驗取多批次樣品測定，結果一致才可采用。因中藥復方與西藥不同，后者所謂干擾組分均為結構已知具有一定規(guī)格的成分，而中藥則大部為未知成分且不衡定，有些測定只有一次性的意義，不具重現(xiàn)性。（3）回收率測定問題 在一些實驗設計中，常見到所謂的加樣回收測定，不是在稱樣開始時即加入純品，而是將其加至制備好的供試品溶液中，這樣不能考察提取、純化過程中被測成分是否損失；也有在薄層掃描試驗中，于薄層板上依次點對照品溶液、供試品溶液及對照品與供試品重疊點于同一原點上，測定后計算，這只能反映板上的回收率，而不能代表全部含量測定方法的回收率。（4）對照品問題 含量測定用對照品只能用化學純品，不可用藥材對照品，因為不可能得到所含成分含量同一的樣品。測定大類成分如皂苷也不宜采用總皂苷為對照品，因總皂苷組分復雜，各成分比例不穩(wěn)定，不同批次的皂苷難于保持一致，從而使含量測定結果不穩(wěn)定。測定總皂苷時，采用同系物之一的化學單體并以其計算，定出限度是可行的。如測定人參總皂苷，以人參皂苷Rbl、Re等作對照品并計算。但如處方中含有的不同藥味皂苷成分結構差異較大，有的甚至不是皂苷而是其它各種苷類，例如處方中有黃芪、人參、地黃、知母、赤芍等，而以黃芪甲苷或人參皂苷Re為對照品測定并計算含量，科學根據(jù)不足，不能成立。5含量限度的制定 含量限度是在檢驗方法確定的基礎上，積累足夠的數(shù)據(jù)后總結提出的。成藥的合格是建立在藥材原料的質量保證上的。日本對栽培藥材常收集上百件樣品進行測定，對結果做分布分析，有的下限取在去除約5%樣品的數(shù)值上，即將占總量5%的質量最差、分布極小的樣品判為不合格。我國則根據(jù)寶貴的傳統(tǒng)鑒別經驗，將藥材樣品依質量優(yōu)劣順序排列，如所測成分含量高低與之相應，則將質次但仍可藥用者取為下限。必須強調的是，含量限度的制定應有足夠的、具代表性的樣品數(shù)據(jù)為基礎。否則就不能反映實際情況，實踐中勢必會遇到種種問題。新藥申報生產時應積累10批以上的含量數(shù)據(jù)，提出限度。中藥制劑含量限度規(guī)定的方式，根據(jù)現(xiàn)行各級標準有以下幾種。一種是規(guī)定下限，如藥典中收裁戊己九，%，六味地黃丸，山茱萸中熊果酸、%、%（大蜜九）；種是規(guī)定幅度，如部頌標推進口西洋參藥材含人參總皂為5～10%，含西洋參制劑則應根據(jù)處方量及工藝制相關數(shù)值規(guī)定制劑含量幅度；另一種為規(guī)定標示量，如2005版藥典中收載華山參片，～%。應該強調指出中成藥與某些制劑不同，如甘草流浸膏類可根據(jù)甘草酸的含量調節(jié)甘草浸膏的投料量，而中藥則必須保證處方不變，成品率穩(wěn)定。因此只有投入合格的原料才能保證成藥的質量。關于中成藥的含量表示方法，有%、mg/片、g/丸、mg/m1（液體制劑）等。凡藥品中規(guī)定有含量測定項的，其原料藥材必須對成品中所測成分規(guī)定含量限度，防止盲目投料，可限定為本制劑專用的原料藥材規(guī)格，暫不要求代表全國各地藥材的質量，達不到要求者可以不進貨，不投料，以保證產品質量。六、質量標準起草說明起草說明是質量標淮制定的詳盡的技術資料。對質量標準中各項均應作逐項說明。名稱、處方、制法、功能主治、用法用量等，在申報資料中各有要求，故在起草說明中可以簡要概述，但不可從略。而有關檢定該藥真?zhèn)蝺?yōu)劣各項均應重點詳細說明。對鑒別、含量測定藥味各測定成分的選擇依據(jù)，方法原理，實驗條件的選擇和方法學考察資料和數(shù)據(jù)，空白試驗說明雜質干擾及排除情況，附有關圖譜如最大吸收波長選擇圖、標準曲線圖，色譜圖包括空白試驗圖，薄層色譜附彩色照片，顯示色譜的真實性。闡明確定檢查及含量限（幅）度的意義和依據(jù)。新藥申報生產或標準試行期滿轉為部頒標準前至少應有10批以上產品的測定數(shù)據(jù)。值得強調的是，應闡明其它曾經做過的試驗，包括不成熟的尚待完善或失敗、暫末收載或不能收載于正文的檢定方法的理由，并提供詳盡的實驗資料，以便有關部門審查其實驗設計是否合理，以確定為主觀原因或客觀原因，從而判定是否需要作進一步實驗的依據(jù)。起草說明的書寫格式應按質量標準項目依次予以說明，其與研究報告不同，不能以綜述性討論代替。22 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