中國藥典xxxx年版抗生素品種增-資料下載頁

　　

【正文】 l l ELSD屬于通用型檢測器 ,幾乎對所有的化合物均有響應，流動相和環境溫度對響應值的影響小 ,適宜用于無特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，l 由于其色譜響應值 (峰面積的對數值 )與對應的質量（溶液濃度的對數值）呈線性關系，因此用回歸方程計算含量。l 盡管 ELSD檢測器在靈敏度上不如 UV檢測器，但較之 TLC其靈敏度要高得多。l l 柱前衍生 HPLC方法首次應用在中國藥典氨基糖苷類抗生素有關物質檢查項中，l 阿米卡星和硫酸阿米卡星 :l 柱前衍生 HPLC法可以在同一色譜條件下同時檢出卡那霉素、雜質 B、雜質 A以及其它雜質，并可參考 BP2023阿米卡星項下系統適用性色譜圖定位，且藥廠出口采用此法，對本法的可行性已有數據可證明。 圖 阿米卡星混合溶液的分離色譜圖圖 BP2023阿米卡星項下系統適用性色譜l 硫酸鹽 l 除部分品種仍采用原滴定方法，本版藥典首次采用 HPLCELSD方法對其進行測定。l 2023年版中測定硫酸鹽含量采用的是容量法與傳統的重量法測定相比，有其先進性，但滴定終點突躍不明顯 .l 本版藥典建立的 HPLCELSD方法測定硫酸鹽含量，采用硫酸滴定液作為對照品，解決了對照品的問題，該方法方便、準確。l 例如： 2023年版藥典中 。l 硫酸西索霉素、l 硫酸慶大霉素、l 硫酸奈替米星l 硫酸依替米星l 均采用 HPLCELSD方法測定硫酸鹽含量。l 含量測定 有以下五種形式，表 l （ 1）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制劑共 7個標準的含量測定為 HPLCELSD方法。l （ 2）阿米卡星和硫酸阿米卡星及其制劑共 4個標準的含量測定采用柱前衍生化 HPLCUV方法。l （ 3）硫酸新霉素 硫酸核糖霉素及其制劑共 5個標準的含量測定采用微生物檢定法管碟法 .l （ 4）鹽酸大觀霉素及其制劑共 2個標準的含量測定采用微生物檢定法濁度法l （ 5）其他 21個標準的含量測定均采用微生物檢定法管碟法和微生物檢定法濁度法兩法并列，可任選一方法。 表 含量測定HPLC ELSD法柱前衍生化 HPLCUV法微生物 檢 定法 ( 管碟法 )微生物 檢 定法 (濁 度法 ) 微生物 檢 定法 ( 管碟法 或 濁 度法 ) 7 4 5 2 21l 四環素類抗生素l 四環類抗生素的基本特點，l 結構特點 l 四環素類抗生素為四駢苯或萘駢萘的衍生物， 是兩性化合物。分子中存在酚羥基和烯醇型羥基，顯弱酸性；同時含有二甲胺基，顯弱堿性，故遇酸及堿，均能生成相應的鹽，臨床上大多采用鹽酸鹽。l 本品分子結構中具有多個不對稱碳原子，因此有旋光性。l 性狀 l 四環類抗生素都是結晶型物質，分子內含有蒽酮類發色團，一般為黃色結晶性粉末，干燥的四環類游離堿和它們的鹽類都比較穩定，但在貯存中遇光促使顏色變深，可能有降解物產生。l 四環類抗生素的游離堿，在水中的溶解度很小，當 pH值低于 4或高于 8時，可以得到高濃度的四環類化合物的水溶液。 l l l 四環類抗生素在酸性（ ～ ）溶液中， A環上 4位手性碳原子構型易發生差向異構化反應，形成差向化合物，四環素、金霉素、去甲環素等很容易差向化，形成 4差向異構體，l 土霉素由于 5位上的羥基和 4位上的二甲胺基易形成氫鍵，因而較穩定，不易發生差向異構化。l l 四環類抗生素的差向異構化反應，可用下式表示：l l (1)酸性條件下 :l 四環類在較酸溶液中特別在加熱情況下， 產生脫水四環類降解產物，脫水產物的共軛雙鍵的數目增多，因此色澤加深。l (2)堿性條件下 :l 四環類抗生素在堿性溶液中放置一段時間，C環打開，生成無活性的具有內酯結構的異四環類抗生素。在紫外光照射下具有強烈熒光。l (3) 四環類抗生素能與許多金屬離子形成有色絡合物。l 在無菌檢查去抑菌作用時可以利用該性質。l 也可用于四環類抗生素的分析和鑒定。 品種收載情況 ： 表 品種收載情況原料 制 劑 (12)注射用 眼膏 膠囊 軟 膏 片鹽 酸土霉素 √鹽 酸四 環 素 √ √ √鹽 酸多西 環 素 √ √鹽 酸米 諾環素√ √鹽 酸金霉素 √ √鹽 酸美他 環 素 √ √6 1 1 4 1 5l 本版四環類抗生素修訂情況概要l 性狀 基本未修訂。l 鑒別 l 一般采用 TLC/HPLC、 IR和氯化物反應，部分品種增加了紫外鑒別。l 如 :鹽酸多西環素在甲醇溶液中紫外特征較強 ,故增加了紫外鑒別： 20ug/ml甲醇溶液在269nm和 354nm處有最大吸收，在 234nm和296nm處有最小吸收。l 檢查l l 有關物質測定方法仍以 HPLC為主，但測定條件隨含量測定方法修改有所改變。 色譜條件同修改后含量測定的色譜條件（見表），l 雜質含量計算方法l 四環素已知雜質含量用加校正因子的自身對照法計算，l 米諾環素、土霉素、多西環素用已知雜質對照品定位，用不加校正因子的自身對照法計算，l 金霉素用雜質對照品外標法計算已知雜質的含量。l 限度的確定 l 限度是參考 。l 如：鹽酸多西環素《歐洲藥典》 ，鹽酸多西環素（ DoxycyclineHyclate）中有 6個潛在雜質，分別命名為雜質 A、 B、 C、 D、 E、 F，其中雜質 A(β多西環素，又稱為 6表多西環素， 6epidoxycycline)，是合成過程中美他環素轉變為多西環素時產生的 6差向副產物，雜質 B美他環素是合成中間體，雜質 E土霉素為合成起始原料，雜質 F可能是土霉素中的雜質 2乙酰 2去酰胺土霉素在合成多西環素過程的共存物，雜質 C、D可能是多西環素在溶液或放置過程中生成的差向異構體。 l 2023年版藥典標準中土霉素作為特定雜質的單獨規定限度，因多批原料及片劑中均未檢出土霉素，故將土霉素作為其他雜質控制，另增加對其他單個雜質和總雜質的限度控制。l 如：鹽酸土霉素《歐洲藥典》 ： 4差向土霉素 ≤% ，四環素 ≤% ， 2乙酰 2去酰胺土霉素 ≤% ，其他雜質總和 ≤% ，l 國內樣品 4差向土霉素和四環素的含量很少，故將其作為其他雜質控制，不再單獨規定限度，其他雜質總和 ≤% ；l 三批樣品中 2乙酰 2去酰胺土霉素的含量約為 % ，有文獻報道 2乙酰 2去酰胺土霉素的抗菌活性很低 [2]，但未見其毒性的相關報道，故本標準規定其限度為 % ，l 限度為： 供試品溶液色譜圖中如有雜質峰， 2乙酰 2去酰胺土霉素雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的 （ % ），其他各雜質峰峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（% ）。l 如：鹽酸四環素《歐洲藥典》 ： 4差向四環素 ≤% ， 2乙酰 2去酰胺四環素≤% （該雜質在四環素的峰尾流出），脫水四環素 ≤% ，差向脫水四環素 ≤% 。l 經試驗，國內樣品 4差向四環素的含量均小于 % ，故將《中國藥典》 2023年版標準規定的 4差向四環素 ≤% 的限度改為 % 。l 該色譜條件下首次檢出了土霉素，含量很少，三批樣品均在 % 以下，l 三批樣品中不存在 2乙酰 2去酰胺四環素雜質，如其他樣品含有 2乙酰 2去酰胺四環素時，可將該雜質作為其他雜質控制，規定其他雜質限度為 % ， l 限度為：供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，土霉素、 4差向四環素、鹽酸金霉素、脫水四環素、差向脫水四環素按校正后的峰面積計算（分別乘以校正因子 、 、 、 ）分別不得大于對照溶液主峰面積的 倍（ % ）、 （ % ）、 （ %）、 （ % ）、 （ % ），其他各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的 （ % ）。l l 鹽酸多西環素 ,鹽酸四環素 ,鹽酸土霉素等l 由于 2023年版藥典測定四環素類的流動相中的草酸銨容易結晶析出造成系統堵塞，加之流動相中的二甲基甲酰胺容易吸附在管路和檢測池中，影響后續品種的檢測，l 2023年版藥典的起草時對流動相作了較大修改，對多西環素及其制劑色譜分離的影響因素包括水相緩沖鹽的種類和濃度、 pH值、掃尾劑、有機相、柱溫等進行了系統的考察，確定了新的流動相 . l 用醋酸銨和乙腈替代草酸胺及 N,N－二甲基甲酰胺，l 并在流動相中添加了少量的 EDTA，用經于競爭性抑制色譜填料中殘留重金屬離子與四環素類及雜質的絡合，l 添加了少量三乙胺可以封閉柱填料中部分殘余硅羥基的影響，減少拖尾。l 土霉素，四環素等同系品種經系統考察后也采用了上述流動相系統，僅在醋酸銨的濃度、比例以及 pH值等條件進行了調整。 表 流動相配比見下表 : 表 含量測定流動相 （ 2023年版）鹽酸土霉素醋酸鹽緩沖液 [L 1醋酸銨 L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用醋酸調節 pH值至 ]－乙腈 (88： 12) 鹽酸四環素醋酸鹽緩沖液 [L 1醋酸銨 L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用醋酸調節 pH值至 ]－乙腈 (83： 17) 鹽酸多西環素醋酸鹽緩沖液 [L 1醋酸銨 L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用冰醋酸調節 pH值至 ]－乙腈 (85： 15) 鹽酸美他環素醋酸鹽緩沖液 [L 1醋酸銨 L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用冰醋酸調節 pH值至 ]－乙腈 (85： 15) 鹽酸米諾環素L 1醋酸銨 二甲基甲酰胺 四氫呋喃 (600： 398： 2)，內含 EDTA鈉（與 2023年版）鹽酸金霉素高氯酸 二甲亞砜 水 (8:525:467)(pH小于 )l 按上述流動相對多西環素、四環素、土霉素進行分離研究，可以使主成分與雜質達到良好分離，分離的雜質數基本與 致。圖中代號 EP代號 峰名稱1 E 雜質 E(土霉素 )2 D 雜質 D（ 4差向 6差向多西環素 ,3 C 雜質 C（ 4差向多西環素）4 B 雜質 B（美他環素）5 A 雜質 A(β 多西環素 )多西環素6 F 雜質 F(2乙酰 6脫碳酰胺多西環素 )圖 .多西環素分離圖 出峰順序 (Rt) 峰名稱 4－差向四環素 土霉素 差向脫水四環素 鹽酸四環素 鹽酸金霉素 脫水四環素 圖 .四環素分離圖出峰順序(RT)峰名稱 4差向四環素峰（與土霉素色譜峰相對保留時間約為 ）10789 土霉素峰 2乙酰 2去酰胺土霉素峰（與土霉素色譜峰相對 保留時間約為 ）圖 .土霉素分離圖l 幾點注意： l (1)由于流動相 pH值在 ，因此需要選擇耐堿性的色譜柱。l (2)主峰與其有關物質的峰形和分離效果受柱溫影響較大，本品檢測時控制柱溫是有必要的。l (3)與主峰相對保留時間為 2乙酰 2去酰胺四環類雜質。在土霉素、多西環素中都存在，故在系統適用性試驗中應規定與其的分離度。l l 采用酸性流動相：氯酸 二甲亞砜 水(8:525:467)(pH小于 )取代了 2023年版的流動相，分離效果如下。試驗過堿性流動相，效果不理想。注意：采用耐酸的色譜柱。出峰 順 序 (RT) 峰名稱 鹽 酸四 環 素 4差向異金霉素（ EICTC） 去甲基金霉素 4差向金霉素 鹽 酸金霉素 乙 酰 2脫氨甲 酰 金霉素（ ADCTC） 2脫水四 環 素圖 .金霉素分離圖圖 4..