藥物定量分析與分析方法驗證(編輯修改稿)

　

【文章內(nèi)容簡介】 lml， 用硫氰酸銨滴定液()滴定 ， 即得 。 每 1ml硫氰酸銨液()相當于 C8H8O2Hg。 氧化性 測定含量 例如含銻和含鐵的藥物，在酸性溶液中可游離出具有氧化性的 Sb5+ 、Fe3+氧化碘化鉀析出碘，用硫代硫酸鈉滴定。（間接碘量法）。 例 葡萄糖酸銻鈉 的 測定 ChP（ 2023） 取本品約 ， 精密稱定 ， 置具塞錐形瓶中 ， 加水 100ml、 鹽酸 15ml與碘化鉀試液 10ml， 密塞 、 振搖后 ， 在暗處靜置10min， 用硫代硫酸鈉滴定液 ()滴定 ， 至近終點時 ， 加淀粉指示液 ， 繼續(xù)滴定至藍色消失 ， 并將滴定的結果用空白試驗校正 。 每 l m l 的硫代硫酸鈉滴定液()相當于 Sb。 Sb5++2I Sb3++I2 H+ I2 +2S2O32 2I +2S4O62 例 枸櫞酸鐵銨的測定 ChP（ 2023） 取本品約 ， 精密稱定 ， 置具塞錐形瓶中 。加水 15ml溶解后 ， 加硫酸 lml， 加熱 至溶液由暗棕色變成淡黃色 ， 放冷至約 15℃ ， 滴加高錳酸鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù) 5s， 加鹽酸 15ml與碘化鉀試液 15ml， 密塞 ， 靜置 3min， 加水50ml稀釋后 ， 用硫代硫酸鈉滴定液 ()滴定至近終點時 ， 加淀粉指示液 2ml， 繼續(xù)滴定至藍色消失 ， 并將滴定的結果用空白試驗校正 。每 lml的硫代硫酸鈉滴定液 ()相當于 Fe。 （二）經(jīng)有機破壞的分析方法 適用于金屬原子與碳原子結合牢固的有機金屬藥物。 一般包括 濕法破壞 、 干法破壞 及氧瓶燃燒法 三種方法。 （ 1）硝酸 高氯酸 消解 消煮時 HNO3具有強的氧化力，熱的濃 HClO4是最強的氧化劑和脫水劑，能將組分氧化成高價態(tài)。加熱時生成無水 HClO4，可進一步與有機質作用，使有機物很快被氧化分解成簡單的可溶性化合物，二氧化硅則脫水沉淀。 HNO3HClO4消解樣品是破壞有機物比較有效的方法，但要嚴格按照操作程序，防止發(fā)生爆炸。 1. 濕法破壞 本法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞，有機金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機金屬離子一般呈高價態(tài)。 ? 本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞。此時宜選用干法灼燒進行破壞。 ? 本法破壞能力強，反應比較激烈。故進行破壞時，必須嚴密注意切勿將容器中的內(nèi)容物蒸干，以免發(fā)生爆炸。 （ 2）硝酸 硫酸 消解 ? 兩種酸都有較強的氧化能力，其中 HNO3沸點低，而 H2SO4沸點高（ 338℃ ）； ?熱的濃 H2SO4具有強的脫水能力和氧化能力，可以比較快地分解試樣，破壞有機物； ?二者結合使用，可提高消解溫度和消解效果。 硝酸 硫酸 消解 常用的 HNO3與 H2SO4的比例為 5:2，消解時，先將 HNO3加入樣品中，加熱蒸發(fā)至小體積，稍冷，再加入 H2SOHNO3，繼續(xù)加熱蒸發(fā)至冒大量白煙，冷卻，加適量水，溫熱溶解可溶鹽，若有沉淀應過濾。為提高消解效果，常加入少量 H2O2。 硝酸 硫酸法 適用于大多數(shù)有機物質的破壞，如染料、中間體或藥物等。破壞得到的無機金屬離子均為高價態(tài)。 本法不能用于含堿土金屬有機藥物的破壞 因堿土金屬可與硫酸形成不溶性的硫酸鹽，將會吸附被測定的金屬離子，使測定的結果偏低 。 改用硝酸一高氯酸法 （ 3） 硫酸 硫酸鹽法 加入濃硫酸作氧化劑 加入硫酸鹽（ 硫酸鉀或硫酸鈉，因硫酸鈉為含水化合物，不利于有機破壞，故一般多采用硫酸鉀） 加入硫酸鹽目的： ? 提高硫酸的沸點，增強硫酸的氧化破壞能力，以使樣品破壞完全。 ? 防止硫酸在加熱過程中過早地分解為三氧化硫而損失。 本法常用于 含砷或銻有機藥物 的破壞，破壞得到的無機金屬離子多為 低價態(tài) 。 （ 4）硫酸 磷酸 消解 兩種酸的沸點都比較高，其中 H2SO4氧化性較強， H3PO4能與一些金屬離子如Fe3+等絡合，故二者結合消解樣品，有利于測定時消除 Fe3+等離子的干擾。 （ 5） 其它濕法 硝酸 — 硫酸 — 高氯酸法 硫酸 — 氧化劑法（過氧化氫法、高錳酸鉀） 破壞后，金屬呈高價態(tài) 試液 適量 H2SO4和 5％ KMnO4 加熱煮沸 冷至室溫 滴加鹽酸羥胺溶液破壞過量的 KMnO4 該方法常用于測定汞的樣品。 KMnO4是強氧化劑，在中性、堿性、酸性條件下都可以氧化有機物，其氧化產(chǎn)物多為草酸根，但在酸性介質中還可繼續(xù)氧化。 硫酸 高錳酸鉀 消解 用濃 H2SO4H2O2氧化劑消煮植物樣品時，其中的有機物經(jīng)脫水碳化、氧化分解，變成 CO2和水，使有機氮和磷轉化為銨鹽和磷酸鹽，可在同一份消煮液中分別測定全氮、磷、鉀。 總氮、總磷、總鉀的測定，樣品的消化均采用 H2SO4H2O2消解法進行消解。 硫酸 過氧化氫 消解 多元 消解法 為提高消解效果，在某些情況下需要采用三元以上酸或氧化劑消解體系，混合溶劑具有更強的溶解能力，應用廣泛。 目的及前提 多元 消解法 硝酸 硫酸 五氧化二礬消解法 硝酸 氫氟酸 高氯酸消解法 硝酸 硫酸 高錳酸鉀消解法 鹽酸 硝酸 氫氟酸 高氯酸消解法 硝酸 硫酸 高氯酸消解法 注意事項： ，一般為硅玻璃或硼玻璃制成的 凱氏燒瓶 ； 離子或干擾測定的其他金屬離子等組分； 品，所以必須按相同條件進行 空白試驗校正 ； 。 樣品的取用量 ， 應視被測含金屬有機藥物中所含金屬元素的量和破壞后所用測定方法而定 。 ?含金屬元素量在 10μg 一 100μg 范圍內(nèi)時，取樣量為 10g。 ?如果測定方法靈敏度較高，取樣量可相應減少。 ?對于生物樣品，一般血樣 10ml一 15ml或尿樣 50ml 2. 干法破壞 將有機物灼燒灰化以達分解的目的。 ?將適量樣品置于瓷、鎳、鉑坩堝中，常加無水碳酸鈉或輕質氧化鎂等以助灰化， ?混合均勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化， ?然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全，即可。 ?適用于濕法 不易破壞完全 的有機物（如含氮雜環(huán)類有機藥物）以及某些 不能用硫酸 進行破壞的有機藥物。 ?不適用于含 易揮發(fā)性金屬 （如汞、砷等）有機藥物的破壞 注意事項： （ 1）加熱或灼燒時，應控制溫度在 420℃以下 （ 2）一定要灰化完全 （ 3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但不要輕易棄去 167。 藥品質量標準分析方法驗證 一、目的 證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求，方法驗證過程和結果均應記載在藥品標準起草和修訂說明中。 二、用途 （一）藥品質量標準起草時，分析方法需經(jīng)驗證。 （二）藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。 三、需驗證的分析項目 1. 鑒別試驗； 2. 雜質定量或限度檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測定； 4. 制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的 測定； 5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。 ?準確度 ?精密度（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性） ?專屬性 ?檢測限 ?定量限 ?線性 ?范圍 ?耐用性 四、驗證內(nèi)容 （一） 準確度（ accuracy） 準確度是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度。 測定結果與真實性的差異 用回收率 R（ recovery）表示 ①接近 100% ②相對恒定 測定回收率的具體方法可采用“ 回收試驗法 ”和“ 加樣回收試驗法 ”。 回收試驗 空白 +已知量 A的對照品 （ 或標準品 ） 測定 ， 測定值為 M %100??AMR 加樣回收試驗 已準確測定藥物含量 P的真實樣品 +已知量 A的對照品 （ 或標準品 ） 測定 ， 測定值為 M %100???APMR 數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用 9次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。 RSD一般在 2%以內(nèi)。 1. 含量測定方法的準確度 原料藥 可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。 制劑 可用含己知量被測物的各組分混合物進行測定 ， 即 采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法 。 如不能得到制劑的全部組分 ， 可向制劑中加入已知量的被測物進行測定 ， 或與另一個已建立準確度的方法比較結果 。 中藥分析 的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在 95～ 105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時，可要求在 90～ 110%范圍內(nèi)。 2． 雜質定量測定的準確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定 。 如果不能得到雜質或降解產(chǎn)物 ，可用本法測定結果與 另一成熟的方法 進行比較 。 （二）精密度（ precision） 精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次（ n）取樣