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蛋白質的化學二ppt課件-資料下載頁

2026-04-28 13:49本頁面

　　

【正文】 SEO PS WTOU EOVE VERL RLA APS HOWT HO 末端殘基 H S 末端肽段 HOWT APS 第一套肽段 HOWT OUS EOVE RLA PS 第二套肽段 HO WTOU SEO VERL APS 推斷全順序 HOWTOUSEO VERLAPS ?借助重疊法確定肽段次序：確定半胱氨酸殘基間形成二硫鍵的位置蛋白質一級結構的順序測定完成后，將未拆開二硫鍵的同一種蛋白質再一次進行專一性的酶解，由此就可以確定完整的蛋白質中二硫鍵的位置。確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。采用胃蛋白酶水解：切點多，生成的肽段包括含二硫鍵的肽段都比較小；酸性環境下防止二硫鍵發生交換，二硫鍵穩定。將所得的肽段利用對角線電泳技術進行分離。然后同其它方法分析的肽段進行比較，確定二硫鍵的位置。二硫鍵位置的確定對角線電泳：把水解的混合肽段點到濾紙中央，在，進行第一向電泳，肽段將按其大小及電荷的不同分離開來。然后把濾紙暴露在過甲酸蒸氣中，使 SS斷裂。這時每個含二硫鍵的肽段被氧化成一對含半胱氨磺酸的肽。濾紙旋轉 90度角在與第一向完全相同的條件下進行第二向電泳。在這里，大多數肽段的遷移率未變，并將位于濾紙的一條對角線上，而含半胱氨磺酸的肽段比原來含二硫鍵的肽小而負電荷增加，結果它們都偏離了對角線。肽斑可用茚三酮顯色確定。 + + 第二向第一向 a b Brown和 Hartlay對角線電泳圖解圖中 a、 b兩個斑點是由一個二硫鍵斷裂產生的肽段二硫鍵位置的確定蛋白質一級結構分析例題 1: 從真菌中分離得到一種八肽 ,氨基酸分析表明它是由 Lys、 Lys、Tyr、 Phe、 Gly、 Ser、 Ala、 Asp組成。此肽與 FDNB作用，進行酸水解，釋放出 DNP Ala。用胰蛋白酶裂解產生兩個三肽（ Lys、Ala、 Ser）和（ Gly、 Phe、 Lys）以及一個二肽。此肽與糜蛋白酶反應即放出自由的天冬氨酸，一個四肽（ Lys、 Ser、 Phe、 Ala）及一個三肽。此三肽與 FDNB反應隨后用酸水解產生 DNPGly，試寫出此八肽的氨基酸序列。蛋白質一級結構分析例題 2: 一個天然多肽，經還原變為兩條肽鏈，這兩條肽鏈的氨基酸序列如下：鏈 1： AlaCysPheProLysArgTrpCysArgArgValCys 鏈 2： CysTyrCysPheCys 這個天然多肽經嗜熱菌蛋白酶處理可得下列各肽，其組成分別為： 1.(Ala、 2Cys、 Val) 2. (Arg、 Lys、 Phe、 Pro) 3. (2 Arg、 2Cys、 Trp、 Tyr) 4. (2Cys、 Phe) 根據以上給出的條件，指出該天然多肽中二硫鍵的位置？蛋白質一級結構分析例題 1 答案 : Ala Ser Lys Phe Gly Lys Tyr Asp 蛋白質一級結構分析例題 2 答案 : AlaCysPheProLysArgTrpCysArgArgValCys S S CysTyrCysPheCys S S S S 練習題 : 某九肽組成為兩個 Gly,兩個 Phe,Tyr,Met,Asp,Arg和 Pro,經胰凝乳蛋白酶水解得五肽和四肽 ,四肽組成為Phe,Tyr,Gly和 CNBr處理產物經陽離子交換樹脂層析并洗脫得一組成為 Arg,Phe和 Gly的三肽 .此九肽經胰蛋白酶水解得 Phe,如用 FDNB反應后在水解測得三 . 蛋白質序列數據庫

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