野生櫻桃李果皮色素提取及穩定性研究畢業論文(編輯修改稿)

　

【文章內容簡介】 氯化亞鐵、氯化銅、氯化鈣。TP213電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）、高速萬能粉碎機（型號:FW80，粉碎細度：40200目）、電熱恒溫水浴鍋、9203A熱空氣干熱消毒箱（上海艾牧生物科技有限公司）、UV2600PC紫外可見分光光度計、RE52旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）、PHBJ260便攜式pH計（上海精密科學儀器有限公司）、回流管、錐形瓶、蒸餾瓶等。[1719] 櫻桃李果皮色素提取工藝的確定 櫻桃李果皮色素提取工藝流程解凍櫻桃李果實→剝皮→干燥→粉碎→回流提取→抽濾→色素原液。 最佳果皮色素和最大吸收峰的確定將櫻桃李紅果果皮色素原液稀釋100倍、紫果果皮色素原液稀釋300倍，作為待測液，用紫外可見分光光度計在波長200～800 nm進行光譜掃描，確定兩種果皮色素的最大吸收波長。 櫻桃李紫色果果皮色素提取條件的單因素試驗 乙醇濃度的選擇：稱量2g的櫻桃李紫色果果皮干粉5份，分別放入50ml規格的燒杯中，編號，再分別加入30%、40%、50%、60%、70%的乙醇溶液各32ml，玻璃棒攪拌混勻，再分別倒入相應編號的回流瓶中，置于60℃條件的電熱恒溫水浴鍋中，回流管全部安裝完畢，開始浸提1h。抽濾后得色素浸提液，分別以相應濃度的乙醇浸提液作參比，于波長536nm的范圍內測其吸光度。重負3次。 料液比的選擇：稱量2g的櫻桃李紫色果果皮干粉5份，分別放入50ml規格的燒杯中，編號，再分別按料液比（1：1:11:11:11:18）加入70%的乙醇溶液各20ml、24ml、28ml、32ml、36ml，玻璃棒攪拌混勻，再分別倒入相應編號的回流瓶中，置于60℃條件的電熱恒溫水浴鍋中，回流管全部安裝完畢，開始浸提1h。抽濾后得色素浸提液，以70%乙醇溶液作參比，于波長536nm的范圍內測其吸光度。重負3次。提取溫度的選擇：稱量2g的櫻桃李紫色果果皮干粉4份，分別放入50ml規格的燒杯中，編號，再分別加入70%的乙醇溶液32ml，玻璃棒攪拌混勻，倒入相應編號的回流瓶中，再分別于50、60、70℃的溫度條件下浸提30min。抽濾后得色素浸提液，以70%乙醇溶液作參比，于波長536nm的范圍內測其吸光度。重負3次。提取時間的選擇：稱量2g的櫻桃李紫色果果皮干粉4份，分別放入50ml規格的燒杯中，編號，再分別加入70%的乙醇溶液32ml，玻璃棒攪拌混勻，倒入相應編號的回流瓶中，于50℃、1h、2h。抽濾后得色素浸提液，以70%乙醇溶液作參比，于波長536nm的范圍內測其吸光度。重負3次。 色素提取正交試驗以單因素試驗結果為參考，選用L9(34)正交試驗設計表，即4因素：乙醇濃度（A）、料液比（B）、提取溫度（C）、提取時間（D），從中各取3個水平來進行正交試驗。抽濾得到的色素液，以相應的乙醇濃度作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。重復3次。 果皮色素的純化 樹脂的預處理活化將已用無水乙醇浸泡24h的NKA9樹脂填充進層析柱約2/3,第一遍用蒸餾水過柱至滴水透明；第二遍用5%的鹽酸溶液100ml過柱，再用蒸餾水中和水滴至中性；第三遍用2%的氫氧化鈉溶液100ml過柱，再用蒸餾水中和水滴至中性。然后將層析柱中已活化的樹脂倒出在塑料盒中進干燥箱40℃條件下干燥12h，得干燥的樹脂為下面的色素純化單因素試驗及正交試驗備用。 色素純化條件的單因素試驗純化溫度的選擇：取2ml色素浸提液倒入錐形瓶中，再取50%乙醇溶液20ml（按1:10的稀釋比）稀釋上述色素液，共取相同的4份，從中取一份初始樣液。再各稱量1g樹脂，分別加入上述4個錐形瓶中，編號。放進搖床，分別在50、60℃的溫度條件下搖1h。抽濾后，回收樹脂，得樹脂吸附后的色素液，以50%乙醇溶液作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。稀釋比的選擇：取2ml色素浸提液5份，分別倒入錐形瓶中，編號，再分別按稀釋比（1:01:1:11:14）加入50%的乙醇溶液各16ml、20ml、24ml、28ml，現在分別取相應稀釋比的初始液并編號。再各稱量1g樹脂分別加入上述4份稀釋液，再編號，進搖床，在40℃的溫度條件下搖1h。抽濾后，回收樹脂，得樹脂吸附后的色素液，以50%乙醇溶液作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。洗脫劑的選擇：分別取2ml色素浸提液4份，倒入錐形瓶中，編號，再各取蒸餾水20ml（按1:10的稀釋比）稀釋上述色素液，然后各稱量1g樹脂加入上述稀釋液中，進搖床，在40℃的溫度條件下搖1h。抽濾后，棄濾液并留一份濾液為初始液，留樹脂并將這4份樹脂分別倒入4個干凈的錐形瓶中，再分別加入40%、50%、60%、70%的乙醇溶液各10ml，編號，進搖床，在40℃的溫度條件下搖10min。抽濾后，再回收樹脂，得洗脫樹脂后的洗脫色素液，分別以40%、50%、60%、70%的乙醇溶液作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。純化pH值的選擇：取2ml色素浸提液倒入50ml規格的燒杯中，再取50%乙醇溶液20ml（按1:10的稀釋比）稀釋上述色素液，共取相同的4份，用飽和NaHCO3溶液分別調pH值為8，對其分別編號。再取4個干凈的燒杯，分別倒入30ml的50%乙醇溶液，調pH值為8。將不同pH值的色素浸提液倒入4個50ml規格的容量瓶里，再分別用相應pH值的50%乙醇溶液定容至50ml，得4份等量的不同pH值的色素稀釋液，各取一份初始液并編號。然后各量取25ml不同pH值的色素稀釋液，倒入錐形瓶中，編號，再各稱量1g樹脂加入上述4份稀釋液中，進搖床，在40℃的溫度條件下搖1h。抽濾后，回收樹脂，得樹脂吸附后的色素液，以50%乙醇溶液作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。 色素純化正交試驗以單因素試驗結果為參考，選用L9(34)正交試驗設計表，即4因素：溫度（A）、稀釋比（B）、洗脫劑（C）、pH值（D），從中各取3個水平來進行正交試驗。抽濾得到樹脂吸附后的色素液，以相應的乙醇濃度作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度。 穩定性試驗 櫻桃李果皮色素光穩定性試驗分別取4份2ml色素浸提液于錐形瓶中，再分別用20ml蒸餾水將其稀釋，編號A、B、C、D，置于自然光（室內太陽光）下；同法取樣另外相同的4份，編號a、b、c、d（a、b、c、d與A、B、C、D對應），置于室內燈光下，每隔1h測1次吸收值，以蒸餾水作參比。 櫻桃李果皮色素熱穩定性試驗分別取5份2ml色素浸提液于錐形瓶中，再分別用20ml蒸餾水將其稀釋，然后分別在室溫（約22℃）、60、80、100℃下恒溫水浴鍋中保溫1h，編號，以蒸餾水作參比，用紫外可見分光光度計于波長536nm的范圍內測其吸光度（室溫下的一組作對照組）。 pH值的影響 分別取5份2ml色素浸提液于錐形瓶中，再分別用20ml蒸餾水將其稀釋，然后分別用飽和NaHCO3溶液調pH值8，各份補加蒸餾水至pH=8時溶液的總體積，靜置1h。測吸收值。在調整pH值之前測定樣品初始pH值，均為酸性，～，即微酸型。 金屬離子對色素穩定性的影響分別取20份1ml色素浸提液于錐形瓶中，分